氨基酸是生命体基本物质之一,也是常见的饲料添加剂、食品添加剂和药物制剂成分。对于氨基酸分析目前存在样品处理需进行衍生化、衍生物不稳定、运行费用高、仪器昂贵、反应条件冲突、操作时间长等问题。蒸发光散射检测器是一种质量检测器,其检测原理为依靠物质的挥发性不同而进行检测,与物质本身结构没有关系,适用于食品安全、药物分析、中药成分分析等领域。而Halo核壳色谱柱由于具有2.7μm的核壳多孔填料,能达到1.6μm填料的分离度的同时还具有在普通液相色谱仪器上适用的柱压,大大提高复杂产物的分离度。基于上述背景,我们以蒸发光散射检测器(ELSD)、“HALO”核-壳型新型填料液相色谱柱联用,初步构建了一种高效液相色谱—蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)直接测定20种未衍生氨基酸的分析方法,并将其用于复方氨基酸注射液中氨基酸含量的测定。该方法快速、准确、稳定、灵敏,对混合氨基酸进行了有效的分离。本论文总共分为五章,分别包括以下主要内容:第一章介绍选题背景和意义。一一介绍了氨基酸的种类和应用,核壳色谱柱的简介和蒸发光散射检测器的原理,综述了氨基酸分析方法和研究进展。第二章主要采用HILIC色谱柱、新型色谱柱HALO柱、常规普通C18色谱柱、和HALO Amide柱对氨基酸的分离进行了初步的筛选,发现普通C18色谱柱上要实现氨基酸的基线分离,运行时间至少要40分钟左右;HILIC柱内径为1.0 mm,实验中明显发现该柱的柱容量和分离能力都相对较差,经过流动相种类和梯度的调整,明显没有HALO柱的分离效果好;极性嵌入基团的HALO Amide柱对前6种亲水性较强氨基酸的分离并未能起到明显的提高作用,同时因为柱子整体含碳量的降低,反而使得整体分离的情况稍有变差。对色谱柱柱长的调整,在梯度不变运行时间不变的情况下,氨基酸的保留明显15 cm柱会更好些,柱长增加,系统压力仍在仪器耐压范围内。综合以上对比,15 cm的HALO C18色谱柱可以达到氨基酸的分离要求。第三章主要构建核壳柱液相色谱-蒸发光散射检测20种未衍生氨基酸方法的开发。通过对流动相中有机相种类、水相中三氟乙酸、七氟丁酸、九氟戊酸浓度、流速、柱温等条件进行优化,同时进行了蒸发光散射检测器参数的优化,最终确定了采用HALO C18柱(2.7μm,4.6 mm I.D.×15 cm),以甲醇-九氟戊酸-七氟丁酸-三氟乙酸-水为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 ml/min,ELSD飘移管温度40℃,载气流速3.0 L/min,对20种未衍生氨基酸进行分离检测。第四章主要对筛选的色谱方法进行了分析方法验证。结果氨基酸的质量浓度在0.01~1.0 mg/ml范围内,其峰面积的对数值与进样质量的对数值呈良好的线性关系;氨基酸的检出限介于20~50 ng之间,样品加标回收率为89.0%~111.2%。连续进6针,各氨基酸的精密度均符合要求。不同仪器、不同批号色谱柱进行系统实用性实验,均符合要求。该方法可直接进行样品检测,无需样品衍生化处理,简单、快捷。第五章总结了本论文主要的三部分实验的研究成果,提出了进一步实验及未来的展望。