真姬菇自上世纪八十年代引入中国后,受到越来越多消费者的青睐,其栽培产量也不断提升,现已成为食用菌产业中不可或缺的一部分。目前,有关真姬菇遗传转化技术的研究还在不断完善,为利用该技术获得转基因菌株提供了有利的前提,也为真姬菇基因功能研究和新品种遗传改良做好技术储备。本研究利用花椰菜病毒35S RNA(Cauliflower mosaic virus 35S RNA,Ca MV35S)基因启动子结合蓖麻过氧化氢酶(Castor bean catalase,CBC)基因的内含子,真姬菇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Hypsizygus marmoreus Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,Hm GPD)基因启动子结合其第一个内含子,驱动花青素合成基因表达,构建Ca MV35S-p012和Hm GPD-p021两个遗传转化质粒。两个质粒分别通过农杆菌介导转化真姬菇单核菌株后,利用来自杏鲍菇的萎锈灵抗性基因进行转基因筛选,并对具有萎锈灵抗性的拟转化子经PCR方法进行转基因验证,运用实时荧光定量PCR对阳性转化子中的花青素合成基因的表达水平进行比较分析。结果表明,Ca MV35S和Hm GPD基因的启动子均成功驱动了花青素合成基因在真姬菇中的转录,为增强基因表达而引入的内含子在转录过程中均被正确切割,其中,Hm GPD启动子驱动外源基因表达水平比Ca MV35S启动子驱动外源基因表达水平强22-36倍,说明Hm GPD启动子在真姬菇中驱动外源基因表达的能力更高。同时,本论文以农杆菌介导真姬菇节孢子遗传转化技术为前提,含有花青素合成基因的转化子为基础,对该基因转化子的生物表征、杂交配对、栽培出菇、花青素含量等方面进行了研究。研究表明,利用农杆菌介导的节孢子转化技术获得的转化子,其萎锈灵抗性基因能够稳定遗传;与真姬菇受体菌株Fin C-W-247-F4相比,外源花青素合成基因的加入对真姬菇菌丝生长速度会产生一定影响,而在菌丝、子实体表型方面并没有显著差异;不同pH会对真姬菇子实体的花青素相对含量造成影响;此外,本研究还初步摸索了Cas9基因在真姬菇基因组中的表达体系,首次将含Cas9基因的质粒通过农杆菌EHA105介导转入真姬菇单核菌株中,得到含有外源Cas9基因的转化子。本论文的研究结果将对真姬菇中高效表达外源基因提供依据,获得的转化子可为下一步深入研究花青素合成基因功能提供材料,并将为建立真姬菇CRISPR/Cas9基因编辑系统提供参考。