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白腐菌分泌的酶类具有降解木质素的特性，这些酶类主要包括锰过氧化物酶(Manganese Peroxidase，MnP)、漆酶(Laccase，Lac)和木质素过氧化物酶(LigninPeroxidase，LiP)等。MnP在生物技术应用中极具吸引力，对于木质素和多环芳烃等多种异生物质，MnP具有独特的胞外降解能力。偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)具有较强的木质素分解能力，是我国东北林区常见的一种白腐菌，其产MnP和漆酶的活性较高，近年来对其培养特性、MnP和LiP基因克隆与表达等方面已有一系列研究。真核生物表达体系是高效表达蛋白的可行有效方法，但是研究表明偏肿革褶菌锰过氧化物酶在毕赤酵母中表达量较低。丝状真菌的遗传转化体系已经成熟，其中曲霉具有生长迅速、表达量大、胞外分泌率高、生产的外源蛋白具有天然活性等优点。构巢曲霉（Aspergillusnidulans）的转化方法已经成功地建立。研究白腐菌MnP的丝状真菌的转化与表达，为增加酶的产量提供新的途径，对进一步构建优良工程菌株具有重要意义和理论价值。本研究构建了偏肿革裥菌MnP表达重组质粒，摸索并成功制备了构巢曲霉原生质体，采用原生质体转化方法将偏肿革裥菌3个MnP同工酶基因转化到了构巢曲霉中，结果成功获得3个偏肿革裥菌MnP同工酶基因的构巢曲霉工程菌株。 主要研究成果如下: 本研究首先对构巢曲霉尿嘧啶尿苷营养缺陷体菌株TN02A7进行了制备分生孢子原生质体酶解方法的摸索，结果表明将溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶3种酶以1∶1∶1的比例混合，能有效地使构巢曲霉的分生孢子形成原生质体。 利用RT-PCR方法克隆得到偏肿革裥菌g-mnp1、Lg-mnp2和Lg-mnp3完整MnP同工酶CDS基因。首先构建了载体质粒pMDTM18-T/Lg-mnp1、pMDTM18-T/Lg-mnp2和pMDTM18-T/Lg-mnp3。将pMDTM18-T/Lg-mnp1、pMDTM18-T/Lg-mnp2、pMDTM18-T/Lg-mnp3和整合型表达载体质粒pLB01分别进行双酶切，利用T4连接酶进行连接，成功构建了重组质粒pLB01/ Lg-mnp1、pLB01/ Lg-mnp2和pLB01/ Lg-mnp3。通过CaCl2/PEG原生质体转化的方法，以营养缺陷体菌株TN02A7为宿主菌，将重组质粒整合到构巢曲霉中进行MnP的异源表达，结果筛选到稳定遗传的转化子，成功获得转化子菌株TN02A7-Lg-mnp1、TN02A7-Lg-mnp2和TN02A7-Lg-mnp3。将转化子菌株、菌株TN02A7和偏肿革褶菌CB1在相同的木质素环境下接种于MMPGRT培养液中进行培养。检测MnP活性，结果表明在诱导表达过程中检测前24h内上清培养液中完全没检测到MnP活性，在24h时后检测到Mnp活性，结果TN02A7-Lg-mnp1、TN02A7-Lg-mnp2和TN02A7-Lg-mnp3诱导96h后酶活最高分别为26.7U·L-1、17U·L-1和12U·L-1，在120h后活性基本没有变化。而TN02A7始终无MnP酶活性，表明基因Lg-mnp1、Lg-mnp2和Lg-mnp3已经成功地被转化到构巢曲霉TN02A7-中，并在木质素环境下已得到表达。转化子菌株的MnP表达量要低于原菌株的表达活性。在添加血红素的孢液中测得的MnP酶活性大小和不添加血红素的酶活性大致相同。重组菌株TN02A7-Lg-mnp1、TN02A7-Lg-mnp2和TN02A7-Lg-mnp3的生长量随着培养时间变化不断增长。