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本试验将探索热应激条件下猪卵丘细胞对卵母细胞体外成熟的影响。卵丘细胞卵母细胞复合体(COCs)和裸卵(DOs)在体外成熟培养20h后,在42℃的条件下处理1h,然后一部分COCs脱去卵丘细胞,所有卵子在39℃继续培养23h,试验组共分3组:H1(DOs组,Oh脱去卵丘细胞),H2(21h,即热处理后COCs脱去卵丘细胞组)和H3组(COCs组,44h脱去卵丘细胞),根据试验组卵丘细胞处理方法,分别设相应对照组C1、C2和C3组,对照在39℃进行44h成熟培养.44h成熟培养完成后分别对各组卵子进行形态学观察,统计成熟率.结果发现H1和H2组的成熟率与对照没有显著差异,而H3组成熟率要明显低于对照组(39.2±5.7%和78.2±8.2%)。经44h成熟培养、质量合格卵子经电激活后在体外发育培养,结果显示热处理组与对照组间的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数没有显著差异(P>0.05)。但裸卵组(H1和C1组)囊胚率要明显低于其它组(P<0.05),Comet检测和TUNEL检测结果表明热处理未对各组卵子DNA造成损伤,也未引起卵子凋亡。对卵丘细胞的Comet检测结果表明热处理后0h卵丘细胞的DNA发生明显损伤,Comet检测阳性率(63.5±13.7%)明显高于对照组(8.9±2.5%)(P<0.05),再经23h成熟培养后热处理组卵丘细胞Comet检测阳性率显著增加(74.8±7.4%)(P<0.05)。对卵丘细胞的TUNEL检测结果表明热处理后0h卵丘细胞凋亡比例与对照组相比并未上升(4.2±1.0%和4.5±1.0%),而经过23h成熟培养后热处理组卵丘细胞凋亡比例显著高于对照组(21.4±2.1%和5.7±0.7%)(P<0.05)。
本试验结论为:热处理后猪卵丘细胞DNA损伤明显并诱发凋亡,在继续培养过程中卵丘细胞的存在会阻碍卵母细胞成熟;42℃的条件下热处理1h不会造成猪卵母细胞DNA损伤和凋亡;在体外成熟过程中卵丘细胞对猪卵母细胞孤雌发育潜力影响显著。