【摘 要】
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稻瘟菌(Magnaporthe grisea(Hebert)Barr.。无性世代为Pyricularia grisea(Cooke)Sacc.)既是粮食生产上的重要病原真菌,也是研究植物与病原微生物相互作用的重要模式生物,从
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稻瘟菌(Magnaporthe grisea(Hebert)Barr.。无性世代为Pyricularia grisea(Cooke)Sacc.)既是粮食生产上的重要病原真菌,也是研究植物与病原微生物相互作用的重要模式生物,从全基因组水平分析研究该真菌的致病关键基因,可以加深对该真菌致病机理的认识,为抗稻瘟病水稻品种选育和稻瘟病防治策略的制定提供理论依据。同时,也为研制开发出能干扰致病关键基因表达的新型药剂,最终控制稻瘟病提供全新的途径。 为此,本研究利用所在实验已经建立的遗传转化体系,通过农杆菌T-DNA介导转化稻瘟菌菌株Y34,使T-DNA插入突变体数目达到6855个,转化率达到300个突变体/1.0×10~6个分生孢子。将其中1600个突变体接种到日本晴(Nipponbare,对稻瘟病高感的水稻品种)和C101(对稻瘟病高抗的水稻品种)上,以测定其致病性,结果获得173个致病性降低或丧失的突变体。同时对这些突变体进行形态学对比观察,结果获得产孢相关突变体33个,其中分生孢子形态异常的突变体4个,分生孢子产量降低的突变体19个,丧失分生孢子产生能力的突变体10个。 从33个产孢相关突变体中取13个突变体的基因组DNA进行PCR扩增,结果全部都扩增到潮霉素磷酸转移酶(hph)基因序列,而野生型基因组DNA扩增不到,表明突变体的表型变化是由于外源DNA插入所致。采用改进的TAIL-PCR方法对这13个突变体基因组DNA进行扩增,结果获得10条特异扩增片段。对这10条DNA序列进行克隆和测序,结果获得6条序列信息,其中3条序列为T-DNA插入位点的侧翼片段,属于稻瘟菌基因组序列,另外3个为载体“主干”(backbone)序列。将这3条侧翼片段与稻瘟菌基因组序列进行比对,结果如下: ①T-DNA插入位点右侧翼1120bp序列。该片段从突变体Y34-0145的T-DNA插入位点右侧翼扩增得到。T-DNA在该突变体的插入位点位于稻瘟菌70-15的Ⅲ号染色体2.917重叠群的3500bp处。插入位点与MG04885.4基因相距2800bp。而MG04885.4基因与AL353819同源,被推测为翻译启动辅助因子
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