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机体固有免疫系统通过识别病毒感染过程中产生的相关模式分子启动细胞内抗病毒信号通路,激活转录因子NF-kB和干扰素调节因子(IFN regulatoryfactors IRFs),诱导一型干扰素和炎症因子的表达,最终起到抑制病毒复制的作用。由固有免疫系统对病毒识别所介导的抗病毒免疫信号转导是机体抵抗病毒感染的基础。病毒感染和复制过程中产生的核酸或者蛋白质都属于病毒相关分子模式,它们对应的宿主模式识别受体主要分为两大类:Toll样受体家族和RNA解旋酶MDA5与RIG-I。这些模式识别受体的共同特点是识别病毒产生的相关分子模式,介导细胞内信号转导,最终激活转录因子NF-kB和干扰素调节因子((IFNregulatory factors IRFs)。为了更加清楚地认识细胞内抗病毒免疫信号转导的调控机制,我以MDA5为钓饵进行酵母双杂交筛选,并且得到一个与MDA5特异性相互作用的蛋白:DAK(dihydroacetone kinase)。
DAK属于进化保守的二羟基丙酮激酶家族。在细菌中,DAK磷酸化二羟基丙酮产生磷酸二羟基丙酮,其为甘油三酯合成前体。在哺乳动物细胞中,DAK除了上述功能,还具有黄素单核苷酸环化酶活性。我的研究结果显示,在过量表达和生理条件下DAK与MDA5均有相互作用,而与RIG-I则没有明显的相互作用。在293细胞内过量表达DAK抑制MDA5诱导的IFNβ启动子的激活;过量表达DAK也抑制胞质内双链RNA以及仙台病毒诱导的IFNβ启动子的激活。利用RNAi干扰技术降低细胞内DAK的表达能微弱激活IFNβ启动子,增强胞质内双链RNA以及仙台病毒诱导的IFNβ启动子的激活。此外,我的空斑实验结果表明,过量表达DAK特异性抑制MDA5的抗病毒活性,而DAK的RNAi则增强胞质内双链RNA介导的细胞抗病毒活性。以上结果表明,DAK在生理条件下与MDA5相互作用并且负调控其介导的信号转导。
综上所述,本文通过研究细胞内双链RNA受体MDA5的调控机制,发现MDA5的生理抑制因子DAK,有利于人们进一步寻找自身免疫性疾病和病毒感染性疾病的治疗靶点,为有效治疗和控制某些炎症疾病提供了新的蛋白靶标。