论文部分内容阅读
背景和目的:内皮细胞损伤在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。动脉粥样硬化斑块的动脉壁内普遍处于低氧状态,且低氧可诱导新生血管生成。低氧诱导因子-1(HIF-1)是目前发现的惟一的特异性的缺氧状态下发挥活性的转录因子,其亚单位HIF-1α受低氧信号的调控。内皮间质转化(EndMT)是内皮细胞在低氧等多种刺激因素作用下向间充质细胞转化的特殊状态,该状态下的内皮细胞的物理屏障功能和分泌功能均受到损害。近期有研究表明发生EndMT的血管内皮细胞是构成动脉粥样硬化斑块的重要细胞组分,且斑块内新生血管的内皮细胞多处于EndMT状态。动脉粥样硬化斑块内出现病理性的新生血管,会促进动脉粥样硬化的发展,诱发斑块破裂,与斑块的不稳定密切相关。本研究的目的是从促进EndMT方面解释HIF-1α对动脉粥样硬化斑块内血管新生的作用,HIF-1α是否通过正向调控内皮细胞EndMT的过程,从而参与了斑块内血管新生的过程。
方法:1.选取6周龄apoE-/-雄性小鼠21只,随机平均分成3组并编号,用高脂饲料分别喂养12、24和36周以建立动脉粥样硬化动物模型,同种属6周龄C57BL/6小鼠7只作为对照组。处死各组别的小鼠并取血样和主动脉组织标本,应用全自动生化分析仪检测各组小鼠的血脂水平,病理学方法检测主动脉组织标本。免疫组化方法检测高脂饲料喂养组别小鼠主动脉斑块中HIF-1α的表达情况。主动脉组织冰冻切片后,免疫荧光实验检测斑块内内皮细胞EndMT的程度。2.在体外实验中,培养人主动脉内皮细胞(HAECs),使用TGF-β对HAECs进行干预促进其发生内皮间质转化,并制造低氧环境(37℃,含5%CO2、92%N2、3%O2)培养HAECs,来模拟HIF-1α的影响。蛋白免疫印迹技术(WB)检测CD31和α-SMA等EndMT相关蛋白和HIF-1α蛋白的表达量。BrdU/7AAD双标法流式细胞术检测各组HAECs的增殖情况。
结果:1.成功建立动脉粥样硬化动物模型,与正常对照组小鼠相比,模型小鼠血清的TC、TG和LDL-C的浓度明显升高(P<0.01)。病理学检测结果显示:正常对照组小鼠的动脉壁无脂质沉积,模型小鼠的动脉壁上肉眼可见脂质沉积,且斑块病变大小随高脂喂养时间增长而增大。在模型小鼠的动脉粥样硬化斑块中,HIF-1α蛋白的表达情况(P<0.05)和斑块内新生血管随高脂喂养时间增长而增多。模型小鼠斑块内的内皮细胞处于EndMT状态。2.成功建立处于EndMT状态的HAECs细胞株,低氧干预后,EndMT相关蛋白CD31表达量减少,α-SMA表达量升高,流式细胞术检测显示处于EndMT状态的HAECs发生细胞增殖。
结论:HIF-1α可以促进内皮细胞的EndMT程度加深,并促进处于EndMT状态的内皮细胞发生增殖,从而参与了斑块内血管新生的过程。
方法:1.选取6周龄apoE-/-雄性小鼠21只,随机平均分成3组并编号,用高脂饲料分别喂养12、24和36周以建立动脉粥样硬化动物模型,同种属6周龄C57BL/6小鼠7只作为对照组。处死各组别的小鼠并取血样和主动脉组织标本,应用全自动生化分析仪检测各组小鼠的血脂水平,病理学方法检测主动脉组织标本。免疫组化方法检测高脂饲料喂养组别小鼠主动脉斑块中HIF-1α的表达情况。主动脉组织冰冻切片后,免疫荧光实验检测斑块内内皮细胞EndMT的程度。2.在体外实验中,培养人主动脉内皮细胞(HAECs),使用TGF-β对HAECs进行干预促进其发生内皮间质转化,并制造低氧环境(37℃,含5%CO2、92%N2、3%O2)培养HAECs,来模拟HIF-1α的影响。蛋白免疫印迹技术(WB)检测CD31和α-SMA等EndMT相关蛋白和HIF-1α蛋白的表达量。BrdU/7AAD双标法流式细胞术检测各组HAECs的增殖情况。
结果:1.成功建立动脉粥样硬化动物模型,与正常对照组小鼠相比,模型小鼠血清的TC、TG和LDL-C的浓度明显升高(P<0.01)。病理学检测结果显示:正常对照组小鼠的动脉壁无脂质沉积,模型小鼠的动脉壁上肉眼可见脂质沉积,且斑块病变大小随高脂喂养时间增长而增大。在模型小鼠的动脉粥样硬化斑块中,HIF-1α蛋白的表达情况(P<0.05)和斑块内新生血管随高脂喂养时间增长而增多。模型小鼠斑块内的内皮细胞处于EndMT状态。2.成功建立处于EndMT状态的HAECs细胞株,低氧干预后,EndMT相关蛋白CD31表达量减少,α-SMA表达量升高,流式细胞术检测显示处于EndMT状态的HAECs发生细胞增殖。
结论:HIF-1α可以促进内皮细胞的EndMT程度加深,并促进处于EndMT状态的内皮细胞发生增殖,从而参与了斑块内血管新生的过程。