长链非编码RNA FALEC在结直肠癌中的表达及其对化疗敏感性影响的研究

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目的:研究长链非编码RNA FALEC(Long non-coding RNA FALEC,lncRNA FALEC)在结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)中的表达和功能及其对奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)化疗敏感性的影响,初步探索lncRNA FALEC对OXA化疗敏感性的影响机制。方法:1.从TCGA数据库提取结直肠转录组数据和完整的临床资料数据,使用R语言筛选出在CRC中表达具有差异性的lncRNA,合并差异表达的lncRNA数据和临床数据,进行KM(Kaplan Meier)生存分析,筛选出与CRC预后显著相关的lncRNA FALEC,分析lncRNA FALEC表达量与患者临床病理特征之间的关系。2.实时荧光定量PCR(Quantity real-time PCR,qRT-PCR)技术定量分析lncRNA FALEC在正常结肠上皮细胞NCM460及CRC细胞系HT29和RKO中的表达情况,慢病毒转染CRC细胞敲低细胞中lncRNA FALEC的表达,CCK-8(Cell Counting Kit-8)细胞增殖实验、细胞划痕实验(伤口愈合实验)和CCK-8细胞毒性实验检测敲低lncRNA FALEC对CRC细胞的增殖、迁移及OXA化疗敏感性的影响。3.QRT-PCR和免疫印迹试验(Western Blot,WB)检测磷酸酶和张力蛋白同源物(Phosphatase and tensin homologue,PTEN)在正常结肠上皮细胞及CRC细胞中的表达情况,同时检测敲低CRC细胞中的lncRNA FALEC对PTEN表达的影响;使用SF1670(PTEN抑制剂)抑制lncRNA FALEC低表达CRC细胞株中PTEN的表达,通过CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验和CCK-8细胞毒性实验检测抑制PTEN对lncRNA FALEC低表达CRC细胞株的增殖、迁移及对OXA化疗敏感性的影响。结果:1.差异基因筛选共获得在CRC中差异表达的lncRNA 614个,其中494个上调,120个下调,获取有完整病理资料的临床数据245个,KM生存分析显示lncRNA FALEC与CRC患者预后显著相关(p<0.05),lncRNA FALEC高表达组CRC患者生存率显著低于lncRNA FALEC低表达组患者(p<0.05);lncRNA FALEC表达量与肿瘤是否远处转移有关(p=0.027)。2.QRT-PCR测定结果显示,lncRNA FALEC在CRC细胞中的表达显著高于正常结直肠上皮细胞;慢病毒转染敲低CRC细胞中lncRNA FALEC的表达后,CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕实验显示细胞的增殖和迁移能力显著减弱,CCK-8细胞毒性实验表明细胞对OXA的化疗敏感性显著增强。3.QRT-PCR和WB显示,CRC细胞中PTEN的表达显著低于正常结直肠上皮细胞;慢病毒转染敲低CRC细胞中lncRNA FALEC的表达会导致PTEN的表达上调;使用PTEN抑制剂抑制lncRNA FALEC低表达细胞株中的PTEN表达后,CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕实验显示细胞的增殖和迁移能力增强,CCK-8细胞毒性实验显示细胞对OXA的化疗敏感性减弱,表明抑制PTEN可以逆转敲低lncRNA FALEC对CRC细胞增殖和迁移的抑制及对OXA化疗敏感性的促进作用。结论:LncRNA FALEC在CRC中高表达,lncRNA FALEC高表达与肿瘤远处转移有关,预示着不良预后。LncRNA FALEC可通过抑制PTEN的表达促进CRC细胞的增殖和迁移,抑制细胞对OXA的化疗敏感性。
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