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目的构建氯化钴(CoCl2)作用下的神经胶质瘤U251细胞缺氧模型和左侧颈总动脉结扎的小鼠缺血模型并对其效果进行评价以后,讨论促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)在缺氧条件下对U251细胞小泛素样修饰蛋白-1(small ubiquitin-like modifier,SUMO-1)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)表达的影响以及在缺血条件下对小鼠碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)表达的影响,为研究EPO对新生儿缺氧缺血性脑病的神经细胞保护机制奠定基础。方法1.CCK-8法检测不同浓度、不同时间CoCl2对U251细胞活性的影响。2.实时荧光定量PCR(quantitative real-time RT-PCR,qPCR)法检测不同浓度CoCl2作用下不同组U251细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible-1,HIF-1α)mRNA表达的变化。3.细胞流式术检测CoC12对U251细胞活性氧(ROS)水平的影响。4.U251细胞缺氧模型构建成功后,CCK-8法测定缺氧条件下EPO对U251细胞增殖的影响。5.高通量测序技术筛选CoCl2组和CoCl2+EPO组的差异表达基因。6.qPCR法对高通量测序结果中的和神经细胞保护作用相关的差异表达基因SUMO-1、GLUT-1进行验证。7.构建小鼠左侧颈总动脉结扎的缺血模型:取46只(雌雄各半)3周龄昆明小白鼠随机分成假手术组、缺血组(各组n=23),假手术组仅分离左侧颈总动脉,缺血组分离左侧颈总动脉并结扎,术后2周颈椎脱臼处死,提取小鼠脑组织的mRNA,qPCR法检测MBP基因表达的变化。8.小鼠缺血模型构建成功后,取46只(雌雄各半)3周龄的小白鼠随机分成缺血组、EPO治疗组(各组n=23),EP0治疗组按0.01ml/g,1次/日,腹腔注射EPO,缺血组腹腔注射等量生理盐水。1周后颈椎脱臼处死并提取小鼠脑组织mRNA,qPCR法检测MBP基因表达的变化。结果1.通过CCK-8实验和qPCR检测HIF-1α实验筛选出U251细胞的CoCl2最佳浓度是400μmol/ml;流式细胞实验显示400μmol/ml CoCl2组的活性氧强度显著高于0μmol/ml CoCl2组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.CCK-8实验检测得出缺氧条件下EPO最佳浓度是75IU/ml。3.高通量测序技术筛选出CoCl2组和CoCl2+EPO组与神经保护相关的差异表达基因为SUMO-1、GLUT-1。通过qPCR法验证,结果表明与高通量测序结果相符。4.小鼠在左侧颈总动脉结扎术后2周,处死并提取脑组织中的mRNA,运用qPCR法检测得出缺血组相比假手术组MBP表达量增高,差异具有统计学意义(P<0.05),提示小鼠缺血性脑损伤模型构建成功。5.缺血性脑损伤模型构建成功以后,小鼠腹腔注射EPO 1周,处死并提取脑组织中的mRNA,运用qPCR法检测得出EPO治疗组相比缺血组MBP表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.成功构建了U251细胞的CoCl2缺氧模型,并研究得出EPO可以在缺氧条件下促进U251的增殖及SUMO-1、GLUT-1的表达。2.成功构建了小鼠左侧颈总动脉结扎的缺血模型,并证实了EPO可以在小鼠缺血性脑损伤模型中降低MBP的表达。