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目的和意义:癌症已成为严重威胁人类健康的疾病,寻找有效的抗癌药物与方法,彻底攻克癌症,是医学界重要的课题.研究和实践证实:许多中药可以发挥直接的抗肿瘤作用.中药康复新是从大蠊(蟑螂)提取物中精制出的活性成份,有报道发现康复新在临床治疗中对恶性纤维组织瘤、头颈部肿瘤具有一定的抗癌作用和增强免疫力的作用,但未见基础研究的相关报道.我们最近经体外MTT实验发现,康复新对个旧肺腺癌(GLC)、个旧肺鳞癌(YTMLC)、低分化胃腺癌(BGC-823)、非小细胞肺癌(A<,549>)、卵巢癌(TYK)、胃癌(SGC-7901)、乳腺癌(MCF-7)等肿瘤细胞株都有较强的杀伤能力.此外,云南省政府在"云南省医药工业十五规划"中,已把对美洲大蠊系列昆虫药品的研发列为云南省重点培育的五大系列"云药"特色产品之一.鉴于上述结果,为了进一步从细胞及分子水平研究中药康复新的抗癌效应及其作用机制,我们选用BGC-823肿瘤细胞系,采用现代医学研究手段,探讨康复新对BGC-823肿瘤细胞的细胞毒作用和诱导凋亡作用及其相关机制.为临床应用中药治疗肿瘤,提高患者生存率,为探索中西医结合治疗肿瘤,提供科学依据.实验内容:本研究主要包括四个部分:(1)改良MTT比色法检测康复新对肿瘤细胞的生长抑制用:我们应用改良MTT法分别检测不同浓度康复新作用BGC-823、GLC、TYK、HeLa细胞48小时时对细胞的生长抑制率并求出各自的IC<,50>,进一步检测不同浓度康复新作用BGC-823细胞24h、48h、72h后对其的生长抑制率和IC<,50>;(2)从细胞水平直接观察康复新对体外培养的BGC-823低分化胃癌细胞诱导凋亡的形态学改变:在倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜和透射电镜下观察康复新诱导体外BGC-823细胞发生凋亡的形态学改变;(3)流式细胞术检测康复新作用BGC-823细胞后的细胞周期的改变;(4)流式细胞术TUNEL法观察康复新诱导BGC-823细胞早期凋亡的情况.主要实验结果:1 .康复新对肿瘤细胞具有广谱的生长抑制作用:不同浓度康复新对BGC-823、GLC、TYK、HeLa肿瘤细胞作用48小时显示了一定的抑制作用,IC50分别为13.99±3.22 mg/ml、15.74±0.41 mg/ml、11.56±1.02mg/ml和17.87±0.68mg/ml,并对细胞的生长抑制作用呈浓度依赖关系.2.康复新对BGC-823细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖关系:不同浓度康复新对BGC-823细胞分别作用24h、48h、72h其IC<,50>分别为17.85±1.06mg/ml、13.76±0.57 mg/ml和11.32±0.14mg/ml(P<0.01),;3.出现典型的细胞凋亡形态:在倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜和透射电镜下可清楚观察到典型的凋亡细胞的形态改变,表现为:核固缩或染色质边聚或凝聚成大块状,可见凋亡小体,线粒体体肿胀增殖,严重的空泡化,随作用时间的延长,细胞增殖速度减慢,细胞体积缩小、变圆.4.康复新可以通过改变BGC-823细胞的细胞周期来抑制肿瘤细胞生长:流式细胞术显示细胞出现明显的凋亡峰,随着作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,细胞周期阻滞在G<,2>/M期,S期细胞数大量减少.5.康复新可早期诱导细胞凋亡:流式细胞术TUNEL结果显示:其作用是细胞凋亡和坏死同时存在.因此,中药康复新抑制肿瘤细胞生长主要是通过改变细胞周期、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等途径来实现的.这为下一步进行康复新体内抗癌作用研究和临床应用提供了一定的实验依据.