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本研究以去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞为研究对象,比较了不同成熟培养液对其成熟率、受精率、胚胎发育率的影响;利用透明带下的精子注射探讨了透明带对去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞受精的影响;利用透射电子显微镜技术在亚细胞结构上研究了去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中超微结构的变化。
一、去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外成熟、体外受精初步研究
本实验探讨了不同成分明确的成熟培养液对去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外成熟、体外受精和胚胎的体外发育的影响。结果表明:
(1) 对于常规的成熟培养液M199、α-MEM而言,去除卵丘细胞的卵母细胞成熟率要极显著低于卵丘卵母细胞复合体。
(2) 选用不同的成熟培养液,可以显著提高去除卵丘细胞的卵母细胞的成熟率。
(3) 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在受精时存在着明显的障碍。
(4) 在成熟培养前去除卵丘细胞对植入前胚胎发育没有影响。
二、精子注入去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞的体外受精
利用透明带下精子注射技术,研究透明带对受精的影响。结果表明:
(1) 利用精子带下注射技术可以极显著的提高去除卵丘细胞的卵母细胞的受精率,表明透明带结构的改变是去除卵丘细胞的卵母细胞存在受精障碍的重要原因之一。
(2) 对于常规的成熟培养液M199和α-MEM而言,去除卵丘细胞的卵母细胞的带下受精率仍然低于卵丘卵母细胞复合体,表明尚有其他不明因素影。响去除卵丘细胞的卵母细胞的受精过程。
(3) 在成熟培养前,卵丘细胞的去除对带下受精胚胎的发育没有影响。
三、去除卵丘细胞的卵母细胞在体外成熟过程中的超微结构变化
去除卵丘细胞会降低小鼠卵母细胞的成熟质量。本章利用透射电子显微镜技术观察去卵丘细胞的小鼠卵母细胞体外成熟过程中的超微结构变化,目的是在亚细胞水平上寻找由于卵丘细胞的去除而导致卵母细胞质量降低的原因。
(1) 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中微绒毛由细长到短粗,由倒伏到直立均与卵丘卵母细胞复合体成熟过程中微绒毛变化规律相符。
(2) 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中线粒体由簇状分布逐渐变为散布于卵质内,该过程与卵丘卵母细胞复合体成熟过程中线粒体变化规律相符。
(3) 去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞在体外成熟过程中,皮质颗粒可能存在继发性生成障碍或者数量异常,该结果可能是去除卵丘细胞的小鼠卵母细胞存在体外受精障碍的原因之一。