论文部分内容阅读
目的:观察白头翁汤正丁醇提取物（Butyl Alcohol Extract of Baitouweng Decoction,BAEB）对外阴阴道念珠菌病（Vulvovaginal Candidiasis,VVC）小鼠阴道中性粒细胞趋化的抑制作用,并进一步探讨BAEB三种主要成分秦皮甲素、盐酸小檗碱、白头翁皂苷B4抑制中性粒细胞趋化的作用机制。方法:1.在用苯甲酸雌二醇刺激雌性小鼠致其假发情状态后,采用移液器按每只鼠2?106 CFU剂量阴道接种白念珠菌SC5314标准株（Candida albicans）构建VVC模型。BAEB治疗浓度分别为20 mg/kg,40 mg/kg,80 mg/kg;革兰染色法和平板计数法分别检查小鼠阴道分泌物中白念珠菌的形态和荷载量;HE染色法分析小鼠阴道组织病理变化;ELISA法检测小鼠阴道灌洗液中LDH、IL-6、TNF-?表达水平;巴氏染色法检查小鼠阴道分泌物中性粒细胞浸润水平;q RT-PCR和ELISA分别检测小鼠阴道组织IL-8、MIP-2基因表达水平和蛋白水平。2.采用DMSO（1.3%V/V）处理人早幼粒白血病细胞（HL60）5 d后,于倒置显微镜下检查细胞形态变化;流式细胞术分析DMSO诱导后细胞CD11b的表达;CCK8法检测秦皮甲素、盐酸小檗碱、白头翁皂苷B4对DMSO诱导后细胞增殖的影响;Transwell法检测秦皮甲素,盐酸小檗碱,白头翁皂苷B4对DMSO诱导后细胞迁移的影响;流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测秦皮甲素,盐酸小檗碱,白头翁皂苷B4对DMSO诱导后中性粒细胞F-actin的产生及其极化的影响;Western blot检测磷酸化AKT/PI3K的表达水平。结果:1.BAEB治疗小鼠VVC后,发现BAEB能显著抑制小鼠阴道白念菌丝形成及减轻其荷载量,改善黏膜病理损伤,降低炎症细胞浸润。与对照组相比,实验组经BAEB处理后炎症因子IL-6、TNF-?及LDH表达水平显著降低（p<0.05,p<0.01,p<0.001）,提示BAEB对VVC有较好的治疗作用。进一步研究发现,趋化因子IL-8,MIP-2在实验组显著下调,和对照相比分别下降了1.9倍和1.5倍（p<0.05）。此外,形态学镜检结果也表明,和对照相比,实验组小鼠阴道分泌物中中性粒细胞浸润水平明显降低（p<0.001）。2.HL60细胞经DMSO诱导后,细胞呈典型的中性粒细胞形态,即细胞核由小而圆的规则形态转变为呈分叶核状的不规则形态。流式细胞术分析表明诱导后细胞CD11b的表达水平明显增加。100μg·m L-1秦皮甲素,8μg·m L-1盐酸小檗碱,80μg·m L-1白头翁皂苷B4可有效抑制f MLP诱导的中性粒细胞趋化,明显降低F-actin的表达;其中盐酸小檗碱可显著地降低磷酸化PI3K/AKT蛋白水平（p<0.05）。结论:BAEB对VVC小鼠的明显疗效可能与抑制中性粒细胞向阴道趋化有关,该作用可能是通过BAEB所含的三种主要组分秦皮甲素、盐酸小檗碱和白头翁皂苷B4下调中性粒细胞F-actin表达和调控PI3K/AKT通路来实现的。