三株黑翅土白蚁共生菌的次生代谢产物研究

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昆虫共生菌是一类长期与昆虫共进化的微生物,具有非常丰富的物种多样性及代谢途径多样性。据已有相关报道,昆虫共生菌能够产生全新结构的活性化合物,是新型活性化合物来源的重要途径之一。本文以黑翅土白蚁作为研究对象,从中获得2株黑翅土白蚁体表放线菌(BYTB63与BYF48)和1株黑翅土白蚁菌圃芽孢杆菌(BYJP72)并对其进行了鉴定。运用多种色谱分离技术(硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相柱层析)对目标菌株的次级代谢产物进行分离纯化,运用多种波谱技术(1H NMR,13C NMR,1H-1HCOSY,HMQC,HMBC以及ESI-MS等),并通过多种数据库检索(微谱、SCI-Finder等)对纯化得到的化合物进行了结构上的鉴定。本文共分离得到9种单体化合物结构,鉴定了7种化合物结构,其中4种化合物为新化合物;进一步测试了新化合物抗细菌和细胞毒活性。结果分述如下:1.采用形态学观察和分子生物学的方法对BYTB63进行了鉴定,BYTB63被鉴定为田无链霉菌Streptomyces tanashiensis BYTB63。从菌株S.tanashiensis BYTB63的次生代谢产物中分离纯化得到4个新活性化合物,分别为:termstrin A(1)、termstrin B(2)、termstrin C(3)、termstrin D(4)。采用滤纸片扩散法测试了4种新化合物对大肠杆菌,四联球菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性,结果表明在30μg/滤纸片浓度条件下,化合物1和4对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最好,抑菌圈直径分别为12.85和11.17 mm,与阳性对照青霉素钠(抑菌圈直径值为13.15mm)相当;化合物2对金黄色葡萄球菌具有中等的抑菌作用,其抑菌圈直径值为9.13 mm。化合物1和2对四联球菌的抗菌活性较弱,抑菌圈直径分别为8.52和8.77 mm,小于阳性对照青霉素钠和庆大霉素(抑菌圈直径分别为73.18和41.98mm)。此外采用MTT的方法测定了其对癌细胞和人体正常细胞的细胞毒活性,结果表明化合物1对人体黑色素肿瘤细胞(A375)和人体胃癌肿瘤细胞(MGC-803)表现出中等的细胞毒活性,IC50值分别为22.76和36.65μM,比阳性对照阿霉素弱(IC50值分别为1.01±0.48和0.48±0.61μM)。2.采用形态学观察和分子生物学的方法对BYF48和BYJP72进行了鉴定,BYF48和BYJP72分别被鉴定为Streptomyces enissocaesili BYF48,Bacillus siamensis BYJP72。采用生长速率法测定了两种菌株粗提物对5种农作物致病真菌的抗菌活性,结果表明粗提物在浓度为100μg/m L时,两种菌株粗提物对植物致病真菌都具有良好的抑制效果。菌株S.enissocaesili BYF48,对番茄早疫病菌(Altemaria solani)、苦瓜枯萎病菌(Fusarium.oxysporum f.sp.mornordicae)、玉米弯孢病菌(Curvularia lunata)、棉花枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.vesinfectum)、小麦赤霉病菌(Gibberella sanbinetti)的抑制率分别为75.8%、78.7%、71.4%、59.7%、24.5%;进一步对BYF48粗浸膏化合物进行分离纯化,得到了2个单体化合物,分别被鉴定为pyrrole-2-carboxylic acid(5)和borrelidin(6)。菌株B.siamensis BYJP72对上述五种植物致病真菌抑制率分别为75.8%、57.9%、72.8%、70.0%、17.1%;进一步对BYJP72菌株粗浸膏化合物进行分离纯化,得到了1个单体化合物尿嘧啶(7)和2个疑似新化合物(BYJP72-2和BYJP72-3)。因此,新化合物1和4可以作为新型抗生素先导物,化合物1可以作为抗癌先导物;菌株S.enissocaesili BYF48和B.siamensis BYJP72作为植物源杀菌剂值得进一步研究。
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