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Crizotinib是靶向MET、ALK融合基因和ROS1的多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂。Crizotinib作为MET抑制剂被研发,但首先被FDA批准用于EML4-ALK融合基因阳性的局部进展期及转移性肺腺癌的一线治疗,并同时建议用于存在MET基因扩增的肺癌患者。然而同大多数分子靶向治疗药物类似,半数以上患者在初始治疗1年内发生耐药,其原因包括原发性及获得性耐药突变,多种旁路癌基因的激活等。作为细胞对外界刺激的一种应激性存活机制,自噬参与了多种肿瘤细胞的耐药。常见的抗肿瘤治疗如化疗、放疗、生物靶向治疗等均可以引起肿瘤细胞自噬。Crizotinib能否诱导肺癌细胞自噬发生,从而导致其耐药尚不清楚。目的研究Crizotinib对肺癌细胞自噬水平的影响及自噬在肺癌细胞耐药中所起的作用；分析Crizotinib诱导自噬发生的具体分子机制；在此基础上观察抑制自噬是否增加肺癌细胞对Crizotinib的敏感性。方法通过Western blot.免疫荧光、透射电镜等方法观察Crizotinib处理后肺癌细胞SPC-A1、A549、H2228中自噬相关蛋白表达情况及自噬体的形成；Western blot分析Criztinib处理后肺癌细胞MET, STAT3, AKT/MTOR, ERK等信号通路关键分子的表达情况；采用MTS方法检测通过自噬抑制剂或下调自噬关键基因Beclinl抑制自噬对Crizotinib抗肿瘤作用的影响；采用流式细胞仪定量分析药物处理后细胞凋亡比率；建立肺癌裸鼠移植瘤模型评估自噬抑制剂对Crizotinib的增敏作用。结果Crizotinib能够抑制多种肺癌细胞株的活力,用Crizotinib处理表达MET的SPC-A1细胞,表达EML4-ALK的H2228细胞,和同时具有MET表达和KRAS突变的A549细胞,均可见细胞自噬水平的上升,表现为LC3 Ⅰ向LC3 Ⅱ转换增多；免疫荧光显示LC3Ⅱ puncta增多及电镜下自噬体的增加等。Crizotinib能够抑制MET及其下游STAT3、AKTYMTOR和ERK的磷酸化水平。进一步的研究发现Crizotinib诱导肺癌细胞自噬主要是通过分阶段的抑制胞质及胞核中的STAT3信号通路实现,胞质中STAT3的抑制导致EIF2AK2与其解离,继而磷酸化EIF2A而诱导自噬增加,而胞核中STAT3的抑制导致其转录激活的BCL2水平下降,进而促进自噬水平的持续增加。体外研究表明使用自噬抑制剂或下调自噬关键基因Beclinl抑制自噬促进Crizotinib对肺癌细胞的增殖抑制作用。不同浓度的Crizotinib联合CQ或3-MA作用于SPC-A1和A549细胞后对其抑制作用显著高于Crizotinib单药组,(p<0.001)。以shRNA Beclinl转染SPC-A1和A549细胞,也能够显著提高其对Crizotinib的敏感性。流式细胞仪检测结果表明与Crizotinib单药处理相比,联合CQ和3-MA时,SPC-A1细胞凋亡率显著增加(p<0.05)。裸鼠移植瘤模型表明自噬抑制剂HCQ增加Crizotinib对SPC-A1细胞移植瘤生长的抑制作用。Crizotinib联合HCQ组抑制肿瘤更为明显,而不显著增加毒性。结论多靶点酪氨酸激酶抑制剂Crizotinib能够诱导肺癌细胞保护性自噬,其机制是通过阶段性的抑制胞浆和胞核内的STAT3信号通路实现。抑制自噬促进Crizotinib在体内外对肺癌细胞的增殖抑制作用,提高细胞凋亡率。联合自噬抑制剂可以作为增敏Crizotinib治疗肺癌的一种新的策略。