论文部分内容阅读
EV71肠道病毒是导致手足口病的最主要病毒。每年有数百万儿童遭受手足口病困扰,可是现今并没有有效的治疗药物。EGCG是一种天然的抗病毒药物,已经被证明有多种病毒的抗病毒效果。EGCG具有抗多种病毒的功效,而且其成分来源于茶叶,毒副作用小,对发展新药拥有巨大的潜力。EGCG在水中不稳定,而且容易氧化导致损失。为此,我们用的是已经被证明具有抗病毒活性的经过修饰的脂溶性的EGCG-p(结合了脂肪酸棕榈酸酯Palmitate),EGCG-p提高了化合物的稳定性。到目前为止,鲜有人对EGCG-p抗EV71病毒进行研究,EGCG-p抗EV71病毒仍然是一个未知领域,为了验证EGCG-p具有抗EV71病毒的有效性,本文对EGCG-p体外抗EV71病毒进行初步研究,旨在为进一步的开发临床应用提供理论基础和实验依据。EV71在人横纹肌瘤细胞(RD细胞)中的增殖活动比其他细胞活跃,增殖效率比其他细胞高,因此选取RD细胞作为细胞基质进行体外实验。我们用三种不同方法(先加药物后加病毒;先加病毒后加药物;病毒与药物同时添加)研究EGCG-p抗EV71病毒效果,我们先对EV71病毒进行毒力测试,测得病毒毒力后再运用不同添加病毒与药物的次序方法进行实验,当细胞发生明显病变后运用氯仿抽提RNA法进行RNA抽提,然后逆转录以获得EV71病毒cDNA,最后对其进行荧光定量PCR检测,结果显示先加药物后加病毒具有显著效果。据此,我们认为EGCG-p具有预防EV71病毒的效果。 为了进一步研究EGCG-p抗EV71病毒的分子作用机理,本研究克隆表达了SCARB2受体蛋白与EV71病毒蛋白VP1,通过分子相互作用仪对SCARB2、EGCG-p与VP1进行相互作用。SCARB2受体与VP1进行测试,结果显示SCARB2受体与VP1相互作用的亲和力平均值是0.045μM,Full R2是0.96,说明软件拟合计算可信度比较高。然后我们再对SCARB2受体与EGCG-p进行相互作用,计算出SCARB2受体与EGCG-p相互作用的亲和力平均值是0.0176μM,Full R2是0.95,说明软件拟合计算可信度比较高。最后对SCARB2+EGCG-p与VP1的进行相互作用。比较SCARB2受体与VP1相互作用的亲和力平均值是0.045μM。SCARB2+EGCG-p与VP1相互作用的亲和力平均值是0.549μM,FullR2是0.925。得出在EGCG-p存在下,SCARB2与VP1的亲和力降低了,从分子水平上说明EGCG-p具有抗病毒作用。 从这些实验结果可得出EGCG-p能与受体蛋白SCARB2结合,阻止了EV71病毒的入侵,从分子水平上证明了EGCG-p能起到抗病毒作用,起到预防效果。