论文部分内容阅读
研究背景:低分子肝素(Low Molecular Weight Heparins,LMWH)在围术期脑卒中对脑缺血再灌注损伤(Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury,CIRI)的治疗一直存在争议,究其原因主要是担心其抗凝作用会影响血栓的移位及带来出血风险。然而一系列研究发现在CIRI早期使用低剂量LMWH可以明显减小脑梗死体积,降低梗死边缘区炎症因子生成,而不影响PT、APTT。尽管近年来在肝素类抗炎作用的研究中发现LMWH能够通过抑制核因子kappa B(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化降低炎症因子生成表现出脑保护效应,但对其内在调节机制的研究一直未有明确突破。一些研究推测LMWH可能通过物理结合方式阻止NF-κB核易位活化,这种说法虽然一定程度上能解释现象,但没有证据支撑,无法得到普遍认可。近年来类似研究很多,但大多都没有对LMWH调节NF-κB活化具体中间环节进行研究。而这一问题的探明对于LMWH在治疗领域尤其在CIRI的治疗中如何发挥抗炎作用具有重要的理论价值。近年来研究发现,CIRI早期顶叶皮层梗死边缘区SUMO2/3的增加非常显著,进一步研究发现SUMO2/3的增加能够提高神经细胞对CIRI的耐受性,对梗死半暗带具有保护作用。而其保护作用的发挥,与其能够抑制性调节应激性蛋白如NF-kB等的活化有关。鉴于此,在LMWH降低NF-κB活化的过程中,SUMO2/3是否发挥了中间调节作用有待研究证实。本课题意在就该问题进行深入研究,目的在于探明CIRI中LMWH对SUMO2/3的影响及SUMO2/3在LMWH调节NF-κB活化过程中的作用和意义。主要研究内容与方法:本课题通过建立大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型模拟脑缺血再灌注损伤过程,用LMWH进行治疗处理,采用Western blot、免疫组化、免疫荧光等方法进行实验研究,研究内容包括:1、LMWH对CIRI大鼠神经功能及脑组织损伤的影响;2、LMWH对CIRI大鼠脑组织中NF-kB活化及炎症因子生成的影响;3、LMWH对CIRI大鼠脑组织中SUMO2/3表达及定位的影响。主要研究结果:1.LMWH降低CIRI大鼠脑组织损伤,改善神经功能障碍1.1.神经功能评分结果显示:MCAO后大鼠出现严重的神经功能障碍,经LMWH干预后能明显减轻MCAO导致的神经功能障碍。1.2.大鼠在脑缺血再灌注后出现严重的脑梗死,而LMWH能明显减小梗死体积,尤其能够有效改善MCAO模型梗死敏感区纹状体的损伤程度。2.LMWH降低CIRI大鼠脑组织中NF-kB的活化及炎症因子生成Western blot检测结果显示:再灌注24 h后I/R组大鼠脑组织中IL-1β、NF-κB P65蛋白表达均高于Sham组,而经LMWH干预后的大鼠IL-1β、NF-κB P65蛋白表达相比I/R组均下降。3.LMWH促进CIRI大鼠脑组织中SUMO2/3蛋白的表达及核内转移3.1.Western blot检测结果显示:再灌注3h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中SUMO2/3蛋白表达增强,而LMWH干预后SUMO2/3蛋白量表达进一步增强;3.2.免疫组化和荧光检测结果显示:再灌注3h后,与Sham组相比,I/R组大鼠脑组织中蛋白SUMO2/3水平增加,出现核内移现象,并且主要发生在神经元细胞内,而LMWH干预后发生SUMO2/3核内移现象的神经元细胞进一步增多。结论:LMWH在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中能够促进SUMO2/3表达及核内移,这可能对抑制NF-κB活化减少炎症因子生成产生影响。