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目的:通过研究NCI-H508中双微体的分子结构来揭示双微体的发生模型。对扩增子和断裂点进行生物信息学分析,揭示双微体发生的分子机制。 方法:本研究组前期利用Affymetrix的Genome-Wide Human MappingSNP6.0芯片确定了NCI-H508细胞系中的高扩增区域为14q12-13.1。本研究首先利用FISH杂交技术确定此区域的扩增形式。进一步用半定量PCR的方法,精确该扩增子的大小和边界。另外,利用多色FISH检测相应染色体上缺失情况,揭示双微体的发生模型。 结果:双微体是该扩增子的唯一的扩增形式,并且双微体的结构具有均质性。半定量PCR的方法确定了扩增子的上下游边界分别为chr14:28459445-28459512,chr14:33503036-33503147,双微体的扩增子大小为5043 Kb。双微体上携带基因有:FOXG1,C140rf23,PRKD1,G2E3,SCFD1,COCH,LOC100506071,STRN3,MIR624,AP4S1,HECTD1,HEATRSA,C140rf126,GPR33,NUBPL,Clorf128,ARHGAP5-AS1,ARHGAP5,AKAP6,NPAS3(部分位于DMs上)。在NCI-H508中,3条14号染色体上没有相应位点的缺失,证明该细胞中双微体的产生是复制后事件。 结论:在NCI-H508细胞中,存在着14q12-13.1的唯一一个高扩增区域,该高扩增区域位于双微体上,双微体是唯一的扩增形式,并且双微体的结构具有均质性。该扩增子的上下游边界分别为chr14:28459445-28459512,chr14:33503036-33503147,双微体的扩增子大小为5043 Kb。该细胞中双微体的产生是复制后事件。