目的 观察一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase , NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸-甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester , L-NAME)和脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor , BDNF)对暴露于庆大霉素(Gentamicin , GM)的耳蜗毛细胞所产生的协同防护作用,并初步探讨其作用机制,为药物性聋的防治提供一定的实验依据。方法 利用耳蜗器官离体培养技术,将20只新生4-5天的Wistar大鼠(40耳)随机分为5组,每组4只(8耳),取耳蜗基底膜进行离体培养24小时;而后更换培养液,在分别含有正常对照培养液(A组),GM(B组), GM+L-NAME(C组), GM+BDNF(D组), GM+L-NAME+BDNF(E组)的培养皿中再孵育24小时;将标本在含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液中固定4小时;PBS冲洗,TritonX-100孵育5分钟,浸入TRITC-labeled phalloidin磷酸缓冲液30分钟进行荧光染色;PBS漂洗样品,甘油封固后在荧光显微镜下观察各组耳蜗毛细胞的存活情况并摄像,图像存于电脑中,用Adobe Photoshop软件处理。分别计数标本内、外毛细胞(IHC、OHC)的存活率,进行定量分析。结果 正常对照组A组的耳蜗内、外毛细胞在离体培养48小时后,其平均存活率分别为97.0%±4.0%和98.7%±2.7%;暴露于庆大霉素的<WP=5>B组耳蜗内、外毛细胞平均存活率分别为4.3%±5.1%和4.1%±1.8%;分别加入L-NAME和BDNF的C组和D组耳蜗内、外毛细胞的平均存活率分别为47.9%±6.5%和46.2%±15.9%;44.9%±13.0%和48.7±11.7%;而同时加入L-NAME和BDNF的E组耳蜗内、外毛细胞的平均存活率分别为95.0%±2.3%和96.8%±1.1%。对各组内、外毛细胞存活率进行统计学方差分析,B组、C组和D组均小于A组,差异有显著性(P<0.01);C、D两组无显著性差异,但它们又明显大于B组(P<0.01);E组与A组之间无显著性差异,但E组内、外毛细胞的存活率又明显高于C、D两组(P<0.01)。结论 单独应用L-NAME或BDNF在一定程度上能够防止GM对离体大鼠耳蜗毛细胞的损伤,而二者联合应用则对暴露于GM的耳蜗毛细胞具有较好的协同防护作用,其效果好于两者单独使用,从而为药物性聋的临床治疗开辟了一条新路。