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目的:观察细胞凋亡相关蛋白Bax、Bc1-2、FasL/FasL在压迫性溃疡(又名压疮)伤口边缘组织、中心组织及周围正常组织中的表达及含量变化,探讨细胞凋亡在压迫性溃疡创面愈合中的作用及可能的难愈机制。
材料与方法:①标本采集:在经患者知情同意的前提下,临床收集Ⅲ期压迫性溃疡组织标本8例,每例含溃疡边缘组织及中心组织两个部位。鉴于实验伦理原则限制,取4例其他患者手术中遗弃的正常皮肤组织标本作为对照组。②常规石蜡切片:标本经4%多聚甲醛固定后,常规石蜡包埋并切成厚度为4μm的切片。③凋亡细胞及相关蛋白检测:采用原位末端标记(TUNEL)技术检测凋亡细胞,并通过免疫组化染色方法及原位杂交技术检测Bax、Bc1-2蛋白以及FasL/FasLmRNA在压疮溃疡不同部位的定位以及表达规律。④结果分析:每张切片中随机选择5个视野(x400倍率)观察阳性细胞分布和着色情况,用Image-prol-plus6.0计算机图像分析技术检测阳性细胞表达的强弱。统计分析采用SPSS13.0统计软件,运用单因素方差分析法对计量资料进行统计学处理。数据以((x)±s)表示,以P<0.05为有统计学意义。
结果:①正常组织中,凋亡阳性细胞少,Bax蛋白仅在表皮细胞有极少量表达,而Bc1-2主要定位于表皮细胞及某些成纤维细胞内;从溃疡边缘组织到中心组织,凋亡阳性细胞数逐渐增多,差异具有统计学意义,P<0.01;Bax蛋白逐渐增加并出现在部分成纤维细胞内,表达量明显增高,中心组织与正常组织比较,差异明显,P<0.01,与边缘组织相比,P<0.05;而Bc1-2的表达含量却呈下降趋势,中心组织与正常组织比较,P<0.05。②正常组织中,Fas/FasLmRNA仅在表皮细胞有极少量表达,在其他细胞均呈阴性表达,TUNEL凋亡阳性细胞极少;从溃疡边缘组织到中心组织,FasmRNA阳性表达逐渐增加并出现在部分成纤维细胞内,中心组织与正常组织比较,差异明显,P<0.01,与边缘组织相比,P<0.05;并且凋亡阳性细胞数逐渐增多,差异具有统计学意义,P<0.01。FasLmRNA的表达呈同样的增长趋势,正常组织、边缘组织及中心组织三组组间差异显著,P<0.01。
结论:①Ⅲ期压疮溃疡组织中存在大量的凋亡细胞,并在创面边缘及中心有明显的炎症反应现象。在压疮溃疡创面边缘及中心部位,存在大量的细胞凋亡,而且其凋亡信号大部分来自于与修复相关的成纤维细胞,及部分炎性细胞及血管内皮细胞。由此可见,压迫性溃疡创面组织中细胞的过度凋亡可能是导致溃疡形成以及难以愈合的重要机制。②Bax/Bc1-2在Ⅲ期压疮溃疡创面中对细胞凋亡有重要的调控作用。从溃疡边缘到中心,随着Bax表达增加,凋亡细胞量也明显增加;而Bc1-2表达却显著减少,说明其已经失去抗凋亡作用,所以导致凋亡细胞的增多。③Fas及FasLmRNA在压疮溃疡不同部位的表达对细胞凋亡的启动有关键意义。在创面中心可见棕黄色颗粒广泛存在于大部分成纤维细胞,淋巴细胞及内皮细胞,IOD值显示Fas/FasLmRNA在中心组织的表达比边缘组织显著增多。同时,TUNEL检测结果,发现溃疡中心存在大量的凋亡阳性细胞,各种炎性细胞、内皮细胞及成纤维细胞中均可见阳性颗粒。由此进一步确定,在Ⅲ期压疮溃疡创面中存在大量与修复相关的细胞的过度凋亡,可能是导致压迫性溃疡长久不愈的关键因素。