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干扰素γ（Interferon gamma,IFNγ）具有抗肿瘤和抗病毒等活性,但血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）能阻碍其进入脑组织,因而限制了IFNγ在脑部肿瘤和脑部病毒感染治疗中的应用。蛋白转导域（protein transduction domains,PTD）是HIV I反式激活因子（TAT）的一小段多肽,当TAT PTD与蛋白融合后能促进其高效跨越包括BBB、细胞膜和皮肤等在内的多种膜结构。而且,TAT PTD的分子量小,无细胞毒性,免疫原性极低,不影响融合的蛋白功能。因此,TAT与IFNγ融合后有望使IFNγ获得了跨越BBB的能力而用于脑部肿瘤和脑部病毒感染等疾病的治疗。为此,本实验首先克隆了编码小鼠与人IFNγ（mIFNγ和huIFNγ）及相应TAT修饰的IFNγ（IFNγ-TAT）的cDNA,然后将其构建于pQE-80L表达载体,进而行蛋白表达与纯化;采用MTT法和BrdU-ELISA体外鉴定重组蛋白抑制肿瘤细胞增殖的能力;免疫组化法鉴定重组蛋白进入细胞的能力;采用ELISA法测定SD大鼠脑脊液中小鼠IFNγ-TAT（mIFNγ-TAT）浓度,从而鉴定其跨BBB的能力。取得的主要研究结果和结论如下:1.克隆了编码mIFNγ和huIFNγ的cDNA,所得序列与GenBank中mIFNγ和huIFNγcDNA的序列完全一致。2.构建了mIFNγ-TAT和huIFNγ-TAT cDNA,克隆于pUC19质粒。3.将上述各DNA分别克隆于pQE-80L表达载体并转化于E.coli DH5α。经IPTG诱导后,mIFNγ、mIFNγ-TAT、huIFNγ和huIFNγ-TAT蛋白均获得了较高水平的表达。mIFNγ、mIFNγ-TAT、huIFNγ和huIFNγ-TAT蛋白的相对分子量分别为1.6×104、1.7×104、1.7×104和1.8×104。针对mIFNγ和mIFNγ-TAT优化表达参数为1mmol/L的IPTG在30℃诱导表达4h。而针对huIFNγ和huIFNγ-TAT优化表达参数为1mmol/L的IPTG在35℃诱导表达4h。mIFNγ、mIFNγ-TAT和huIFNγ蛋白主要以可溶性形式存在,huIFNγ-TAT蛋白主要是以包涵体的形式存在。4.经Ni2+-NTA亲和层析系统纯化后,各重组蛋白均达到了较高的纯度,纯化蛋白在SDS-PAGE上呈现单一条带。5.生物学活性分析表明,mIFNγ和mIFNγ-TAT能在体外抑制小鼠H22细胞增殖;