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白细胞介素(IL)-15具有与IL-2相似的生物学功能,能够促进T、B细胞和NK细胞增殖分化,增强CTL/NK细胞毒活性,并能发挥优于IL-2的抗肿瘤作用。本论文是在我们前期工作基础上深入探讨人(h)IL-15在真核细胞内表达和hIL-15基因修饰瘤苗以及IL-15裸基因对小鼠肺腺癌的基因治疗作用。 我们前期工作结果表明,hIL-15 cDNA转染的小鼠肺腺癌细胞LA795A与野生型LA795细胞和空载体转染细胞LA795neo相比,在同基因型T739小鼠体内的致瘤性明显下降。裸鼠实验证实这种抑瘤性至少为T细胞依赖的,且CD8+T细胞为主要的效应细胞。本论文研究进一步发现,经受LA795A肿瘤细胞接种小鼠的存活率明显高于LA795和LA795neo细胞攻击小鼠,其最长存活时间延长了20天。分别将LA795A、LA795neo和LA795三种细胞用60Co照射去增殖,作为瘤苗腹腔免疫T739小鼠后,再以不同浓度的野生型LA795肿瘤细胞进行攻击,发现LA795A肿瘤细胞免疫对T739小鼠肿瘤发生有一定的保护作用。T739荷瘤小鼠经去增殖的LA795A细胞早期治疗后,肿瘤生长虽未得以消退但受到显著抑制,取得较好疗效。经过分析,IL-15基因修饰瘤苗治疗组小鼠脾细胞的特异性CTL和非特异性NK细胞毒活性均高于其它对照组,但以NK水平增高明显。这提示,IL-15基因转染的肿瘤细胞分泌的IL-15可能通过提高机体的CTL和NK细胞毒作用来增强对肿瘤的杀伤能力。进一步观察发现,IL-15基因转染肿瘤细胞后,细胞表面的Ⅰ类MHC分子表达显著降低,推测肿瘤抗原可能是通过宿主抗原呈递细胞(APC)间接呈递给CD8+T细胞的。同时,基因修饰肿瘤细胞分泌的IL-15可能通过增强宿主APC对肿瘤抗原的呈递能力,促进CD4+T细胞对CD8+CTL的活化,直接或间接增强CTL活性,或通过TCR非依赖方式选择刺激记忆表型CD44hiCD8+T细胞增殖,来增强记忆细胞毒杀瘤活性。此外,肿瘤细胞表面Ⅰ类MHC分子水平的降低可解除NK细胞和部分CD8+T细胞表面杀伤细胞抑制受体(KIRs)对细胞毒功能的抑制作用,可能也是CTL,尤其NK细胞毒作用增强的重要原因。健康人外周血单个核细胞对人PG、PGneo和PG1肺鳞癌细胞的体外NK细胞毒实验进一步证实,NK细胞对Ⅰ类MHC分子表达水平显著降低的PG1细胞的杀伤能力明显增强。 hIL-15基因修饰瘤苗虽然在小鼠体内表现出较好的抑制肿瘤作用,但肿瘤细胞中IL-15的分泌量很少。为了解决问题,我们重新构建了人IL-15 cDNA真核表达载体,以期在哺乳类细胞中获得高效稳定表达。 本论文以含有hIL-15 cDNA(574 bp)的测序质粒pBS-SK-IL-15为模板,从编码信号肽的起始密码子AUG开始设计引物,采用PCR技术扩增出hIL-15cDNA 486 bp的全编码序列(去除了所有非编码区),并与pcDNA3质粒的EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ位点定向连接,构建受控于人巨细胞病毒(CMV)启动子的重组真核表