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目的:本研究应用五子衍宗丸(WYP)干预MPTP诱导的帕金森病(PD)小鼠模型,观察WYP对PD的治疗效果及其可能的作用机制,为今后应用WYP治疗PD提供科学的理论依据。方法:C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和WYP治疗组。腹腔注射MPTP(d1:15mg/kg,d2:20mg/kg,d3-d7:30mg/kg)一周诱导建立经典小鼠PD模型。同时,正常组和模型组给予生理盐水50mL/kg/d灌胃,WYP治疗组给予WYP药液16g/kg/d灌胃,2次/d,持续两周。于每次注射MPTP后观察各组动物的一般行为学表现。实验周期第15天,采用步态实验、爬杆实验、胶布移除实验和旷场实验评价动物的运动功能、探索行为及焦虑情绪。通过免疫组化观察中脑黑质TH神经元,计数TH阳性细胞数。微量酶标法检测脑组织GSH、MDA含量。蛋白印迹检测脑组织中SOD和CAT的表达量;检测UPR信号传导通路相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α、XBP1、ATF6的变化以及ERS介导的凋亡途径相关蛋白CHOP、ASK1、p-JNK、Caspase-12、Caspase-9、Caspase-3的表达水平。结果:1.WYP对PD小鼠一般体征及行为学表现的影响1.1 WYP对PD小鼠一般体征的影响首次注射MPTP 10-20min,小鼠即出现不同程度的肢体震颤、竖毛、弓背、竖尾等急性反应,上述症状约持续30-60min后逐渐减轻,伴随有轻度活动减少、反应迟缓等表现。随着给药剂量和给药次数的增加,急性反应渐趋稳定,但模型组较WYP治疗组运动减少、步态不稳、动作迟缓等症状突出。正常动物未出现上述行为学变化。1.2 WYP对PD小鼠行为学表现的影响步态实验结果显示,与正常组比较,模型组脚爪面积显著增多、后爪间距显著增大(P<0.01),RH、LH角度明显增大(P<0.05),LF角度明显缩小(P<0.05),RF角度差异无统计学意(P>0.05);与模型组比较,WYP治疗组脚爪面积减少(P<0.05),后爪间距显著减小(P<0.01),LF角度增大(P<0.05),RF、RH和LH角度变化无统计学差异(P>0.05)。爬杆测试结果显示,与正常组比较,模型组转向和爬杆时间均显著延长(P<0.01);与模型组比较,WYP治疗组用时均明显减少(P<0.05)。胶布移除实验结果显示,与正常组比较,模型组移除时间显著增加(P<0.001);与模型组比较,WYP治疗组用时明显缩短(P<0.01)。旷场测验结果显示,正常小鼠活动路线复杂多变,轨迹遍布整个箱底;模型组行动路线简单且多沿敞箱底部四周贴壁运动,中央区运动相对较少,焦虑情绪明显;WYP治疗后活动量增加,轨迹分布较为均匀,中央区的行为明显增多,焦虑情绪缓解。与正常组比较,模型组穿格次数减少,平均速度减慢,休息时间延长(均P<0.05),移动总距离缩短(P<0.01);与模型组比较,WYP治疗组穿格次数增多,平均速度提高,休息时间缩短(均P<0.05),移动总距离增加(P<0.01)。2.WYP对PD小鼠中脑黑质TH表达的影响免疫组化实验显示,正常脑组织黑质区TH阳性神经元排列紧密,胞质染色较深,颜色均一,模型组神经元呈散在排列,胞质颜色深浅不一,WYP有效改善了这一现象。与正常组比较,模型组TH阳性细胞数显著减少(P<0.001);与模型组比较,WYP治疗组TH阳性细胞数明显增多(P<0.01)。3.WYP对PD小鼠脑内氧化应激的影响与正常组比较,模型组脑组织GSH含量显著降低(P<0.001),MDA含量显著增加(P<0.001),CAT、SOD蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,WYP治疗组脑组织GSH含量显著升高(P<0.001),MDA含量显著减少(P<0.001),脑内SOD、CAT表达均显著升高(P<0.01)。4.WYP对PD小鼠引起的内质网应激的影响4.1 WYP对PD小鼠引起的UPR介导的信号传导通路的影响模型组BIP蛋白表达量较正常组显著增多(P<0.001),WYP治疗组BIP较模型组明显减少(P<0.01)。与正常组比较,模型组p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1α及XBP1蛋白水平显著上调(P<0.001、P<0.01);与模型组比较,WYP治疗组明显减低了p-PERK、p-eIF2α、XBP1(P<0.01)和ATF4、p-IRE1α(P<0.05)的相对表达量。三组动物脑内ATF6含量没有显著变化(P>0.05)。4.2 WYP对PD小鼠引起的ERS介导的凋亡途径的影响相比正常组,模型组凋亡因子CHOP蛋白表达量显著增多(P<0.01),WYP治疗明显降低了这一趋势(P<0.05)。与正常组比较,模型组ASK1、Caspase-12蛋白水平升高(P<0.01),Caspase-9和Caspase-3含量增多(P<0.05);与模型组比较,WYP治疗组Caspase-12、Caspase-9水平下调(P<0.05),ASK1、Caspase-3表达减少,但差异无统计学意义(P>0.05)。三组中p-JNK的蛋白表达水平没有显著变化(P>0.05)。结论:1.WYP可有效改善PD小鼠的一般表现和运动功能,缓解焦虑心理,并减少/延缓中脑黑质DA能神经元的丢失,具有神经保护作用。2.WYP能够上调SOD和CAT的表达,增加GSH的含量,减少MDA的产生,从而缓解脑内氧化应激状态。3.WYP能够调控ERS介导的UPR信号传导通路,包括PREK/eIF2α/ATF4信号通路以及IRE1α/XBP1信号通路,抑制跨膜蛋白的磷酸化和二聚化,减少下游转录因子的表达,从而减轻ERS反应,缓解细胞损伤。4.WYP可以调节ERS介导的凋亡途径,抑制凋亡因子CHOP的转录表达、下调特有凋亡途径中Caspase-12、Caspase-3及Caspase-9的水平,进而减少神经元的凋亡。