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目的:在小型猪自体肾移植模型中探究短效Caspase-3小干扰RNA (small interfering ribonucleic acid, siRNA)在体内外研究中实验结果相悖的机制,进一步探讨短效Caspase-3siRNA对凋亡通路蛋白caspase-3活化的影响,阐明短效Caspase-3siRNA的激活固有免疫反应机制,为其临床转化提供理论依据与实验基础。方法:选择25-30kg雄性广西巴马小型猪12只,随机分为I/R组6只(I/R),Caspase-3siRNA组6只(IR+siRNA)。建立小型猪原位自体肾移植模型,根据前期研究,左肾切取后siRNA组应用预配40ml UW器官保存液+0.3mg短效Caspase-3siRNA(合成序列5’-GGGAGACCUUCACAAACUUtt-3’与5’-AAGUUUGUGAAGGUCUCCCtg-3’)加压灌注,I/R组应用UW器官保存液同样加压灌注,冷藏24小时,移植前留取冷藏后肾脏穿刺标本,再移植到右肾原位。各组于缺血再灌注后48h切取肾脏组织标本。应用real time PCR检测各组肾脏组织中Caspase-3mRNA及Toll样受体信号通路下游相关炎性因子的mRNA相对载量,应用western blot检测各实验组小型猪肾组织中前体Caspase-3、活化型Caspase-3的表达水平。应用western blot方法检测各组肾组织中TLR-3、TLR-7、TRIF、MyD88、PKR、RIG-1、HMGB1蛋白的表达水平。结果:自体肾移植48小时后,IR+siRNA组肾脏组织内TLR-3、TLR-7、MyD88、 TRIF、PKR蛋白含量均较IR组有显著上升,半定量结果具有统计学差异;IR+siRNA组肾脏组织中, Toll样受体信号通路下游相关炎性细胞因子mRNA水平较IR组有明显升高,结果具有统计学差异;免疫印迹法检测Caspase-3蛋白载量,半定量结果显示:移植前穿刺标本,siRNA组较I/R组Caspase-3蛋白载量明显减少(吸光度OD值1.02±0.24vs.2.32±0.28, p<0.01),但移植后48h肾脏标本,siRNA组较I/R组Caspase-3的17kD活性裂解片段明显增多(OD值:0.22±0.04vs.0.06±0.01, p<0.05)移植后48小时,IR+siRNA组肾脏组织标本中HMGB1的蛋白载量显著高于IR组,半定量结果具有统计学差异。结论:本研究中应用的人工合成的siRNA能有效沉默局部Caspase-3mRNA转录Caspase-3蛋白,在冷保存过程中有效减少细胞凋亡,但移植后肾脏的损伤反而有所增加,凋亡细胞增多,活性Caspase-3裂解片段水平上升;造成这一结果的主要原因是由Toll样受体系统识别外源性siRNA,触发启动了机体的系统性炎症反应,增强了局部组织的炎性损伤与细胞凋亡;这一损伤作用能够持续至48小时,可能的机制为负反馈循环作用以及HMGB1蛋白参与了后续的循环级联放大炎症反应及细胞凋亡过程;siRNA疗法作为新型干预手段,在临床应用前仍需进一步消除其系统性副作用。