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目的:本研究拟以中药刺蒺藜干预老龄自发性高血压大鼠(SHR),以下丘脑IKK-β/NF-kB通路为假定作用靶点,评估刺蒺藜通过干预血压调节中枢功能,兼以改善动脉硬化程度,治疗老年单纯收缩期高血压的药效作用;并通过刺蒺藜对体外培养的下丘脑神经元细胞IKK-β/NF-κB信号通路的调节作用,及阻断或激活下丘脑神经元细胞IKK-β/NF-κB通路时的mRNA和蛋白质表达水平的变化,从分子水平深入探讨刺蒺藜治疗老年单纯收缩期高血压的作用靶点和药理机制,为从本质上改善老年ISH提供新的治疗思路。方法:1.刺蒺藜改善老年单纯收缩期高血压的药效学研究:40只16月龄雄性SHR大鼠随机分为刺蒺藜高剂量组(10只,17.2mg·kg-1·d-1),刺蒺藜低剂量组(10只,8.6mg·kg-1·d-1),缬沙坦组(10 只,13.35mg·kg-1·d-1),模型组(10 只,生理盐水 2ml.d-1),同月龄雄性WKY大鼠作为正常对照组(10只,生理盐水2ml·d-1),共灌胃4周,定期记录检测大鼠血压。4周后,大鼠观察结束后,取血、下丘脑、胸主动脉、颈总动脉及肠系膜动脉。检测大鼠血清AngⅡ、AVP、CRP、NPY及PAI的含量;HE染色观察各组大鼠下丘脑、胸主动脉、颈总动脉及肠系膜动脉的组织形态改变;扫描电镜观察各组大鼠胸主动脉,透射电镜观察各组大鼠下丘脑、胸主动脉的亚细胞结构变化;羟脯氨酸检测胸主动脉胶原纤维沉积程度；免疫组织化学染色法观察大鼠下丘脑血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)和神经肽Y(NPY)分布及胸主动脉中AT1和转化生长因子β(TGF-β)的分布。2.刺蒺藜改善老年单纯收缩期高血压的药理学研究:分为两部分,第一部分为体外实验,原代分离培养下丘脑神经元细胞,以AngⅡ诱导高血压细胞模型。首先观察刺蒺藜对下丘脑神经元细胞的体外直接药效,细胞分为正常组、模型组、刺蒺藜低剂量组、刺蒺藜高剂量组、缬沙坦组5组。此后,通过观察刺蒺藜对下丘脑神经元细胞IKK-β/NF-κB通路的干预调节作用以推断其药理学机制,细胞分为正常组、模型组、刺蒺藜组、TPCA-1组、TNF-α组、刺蒺藜+TNF-α组6组。观察下丘脑神经元细胞数量,检测细胞存活率、凋亡率、神经元轴突长度、胞体面积;实时荧光定量PCR法初步筛选可能相关的 IκBα、IKK-α、IKK-β、NF-κBp65、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K的mRNA表达改变;进一步观察IKK-β/NF-κB通路相关IκBα,IKK-β,NF-κB P50,NF-κB p65 mRNA 表达;Western blotting 法检测神经元细胞 IKK-β/NF-κB通路相关蛋白IκBα,IKK-β,NF-κBP50,NF-κBP65表达。第二部分为体内药理学验证实验,RT-PCR法和Western Blot法验证大鼠下丘脑及胸主动脉IKK-β/NF-κB通路相关 IκBα,IKK-β,NF-κB P50,NF-κBP65 的 mRNA 和蛋白表达改变。结果:1.刺蒺藜改善老年单纯收缩期高血压的药效学研究:经药物干预4周后,各组老年SHR大鼠的血压均有不同程度的下降,其中刺蒺藜高剂量组收缩压、舒张压均有显著降低,脉压缩小(P<0.05);血清循环AVP、CRP、NPY、PAI水平显著下降(P＜0.05);HE染色和透射电镜观察下丘脑组织显示,刺蒺藜高剂量组明显改善下丘脑组织形态、细胞数量。HE染色、马松染色、扫描电镜和透射电镜和羟脯氨酸检测显示刺蒺藜高剂量组改善各级动脉血管形态,减轻胶原纤维沉积。免疫组化发现刺蒺藜高剂量组下丘脑AT1分布密度减少,NPY分布密度增加(P<0.05);胸主动脉AT1和TGF-β分布密度减少(P<0.05)。2.刺蒺藜改善老年单纯收缩期高血压的药理学研究:第一部分体外实验,用药后,刺蔡藜高剂量组明显降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的下丘脑神经元细胞于各时间点的存活率、凋亡率、细胞绝对数量、胞体面积,而神经元轴突长度增加(P<0.05);RT-PCR初筛显示刺蒺藜高剂量组细胞IKK-β、NF-κBp65、JAK2、AT1、PKC的mRNA表达显著下调(P<0.05),IKK-α、IκBα、GnRH表达上调(P<0.05)。进一步细胞验证发现,刺蒺藜下调下丘脑神经元细胞IKK-β/NF-κB通路相关IKK-β、NF-κBp50、NF-κBp65的mRNA和蛋白质表达,上调IκBα表达(P<0.05)。第二部分体内实验验证显示,刺蒺藜干预后老年SHR下丘脑和胸主动脉IKK-β/NF-κB通路相关的IKK-β、NF-κBp50、NF-κBp65的mRNA和蛋白质表达明显下降,IκBα表达明显升高(P<0.05)提示刺蒺藜调节下丘脑功能、抑制血管重塑的作用,可能与调节IKK-β/NF-κB信号通路密切相关。结论:刺蒺藜能够稳步降低老年SHR大鼠的收缩压、舒张压和脉压,高剂量刺蒺藜在缩小脉压方面作用优于缬沙坦;刺蒺藜能够降低血清循环AVP、CRP、NPY、PAI含量,改善神经内分泌活动,调节凝血-纤溶系统活性,改善机体炎症水平:通过对大鼠下丘脑和各级动脉病理学研究显示,刺蒺藜可以显著改善下丘脑老化状态,调节中枢作用,延缓衰老;同时改善下丘脑和各级动脉血管的组织形态及亚细胞结构,减轻动脉血管重塑,对平滑肌细胞增殖和细胞外基质沉积有明显抑制作用;体内实验和体外药理学实验都证实,刺蒺藜兼具中枢调节和改善大血管重塑的作用,其降压作用部分是通过抑制下丘脑IKK-β/NF-κB信号通路的活化,延缓下丘脑老化、增加下丘脑血压调节敏感性从而延缓了高血压的病理进程,同时抑制血管重塑、降低血管炎症水平,改善血管功能,降低血管僵硬度,以实现降低血压的目的。