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目的:慢性牙周炎是一种以牙周致病菌为始动因子、宿主免疫反应介导的复杂的慢性感染性疾病。牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）是慢性牙周炎的主要致病菌。P.gingivalis唾液酸酶基因是P.gingivalis编码唾液酸酶的唯一基因,敲除该基因可以严重影响其荚膜合成、生物膜形成及牙龈素活性等,降低P.gingivalis抵抗宿主免疫防御的能力,在慢性牙周炎的发生发展过程中起到了重要的作用。因此,抑制唾液酸酶基因转录、表达或其产物（唾液酸酶）的活性,有望成为预防、减缓或治疗慢性牙周炎发生发展的新方向。2-脱氧-2,3-二脱氢-N-乙酰神经氨酸（DANA）是唾液酸的重要衍生物,对某些细菌唾液酸酶具有较高的抑制效能。本研究目的是通过唾液酸酶抑制剂DANA抑制P.gingivalis唾液酸酶活性后,研究P.gingivalis的生长情况及毒力因子的变化,旨在探索DANA影响抑制牙周致病菌P.gingivalis致病性的可能机制,为应用DANA进行慢性牙周炎的预防和治疗提供新的研究思路和理论依据。研究方法:本实验选用P.gingivalis W83作为实验菌株,采用MTS法检测不同浓度广谱唾液酸酶抑制剂DANA和流感病毒唾液酸酶特异性抑制剂奥司他韦对人单核细胞U937的毒性作用,再使用不同浓度DANA和奥司他韦处理P.gingivalis后采用荧光法检测唾液酸酶活性,联合确定DANA作用于P.gingivalis的合适浓度。1 mM DANA作用于P.gingivalis W83（实验组）,用未加药物的P.gingivalis W83作对照,通过酶标仪检测OD600,绘制生长曲线;通过透射电镜观察细菌的形态;体外形成生物膜,通过活/死菌荧光染色及激光共聚焦显微镜观察生物膜的结构变化;Real-time PCR法检测菌毛基因fimA、fimR和fimS的表达情况;使用蛋白底物测定赖氨酸蛋白酶（Kgp）和精氨酸蛋白酶（Rgps）的活性;通过基质显色法鲎试剂盒检测脂多糖（LPS）的活性。结果:1、MTS法结果显示,当DANA浓度为0.1、1、10mM时,人单核细胞U937的相对增殖率分别为97.61±2.68%、93.75±7.87%和60.98±5.80%;当奥司他韦浓度为0.1、1、10 mM时,人单核细胞U937的相对增殖率分别为96.59±2.93%、93.35±3.86%和76.93±10.05%。唾液酸酶活性测定实验表明DANA对P.gingivalis唾液酸酶活性产生了抑制作用,且抑制作用显著强于奥司他韦。当DANA浓度为0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mM时,唾液酸酶活性抑制率分别达47.13%、59.15%、72.01%、72.69%、72.79%、71.77%。因此,在后续实验中我们选择使用1 mM的DANA,使其对细胞仅产生适当的毒性作用且能明显抑制P.gingivalis唾液酸酶活性。2、通过生长曲线可观察到浓度为1 mM的DANA可明显抑制P.gingivalis的生长。通过活/死菌荧光染色及激光共聚焦显微镜观察P.gingivalis生物膜,发现实验组细菌生物膜中绿色活菌数量显著少于对照组;对照组细菌生物膜平均厚度为54μm,而实验组的平均厚度仅为33μm。3、透射电镜观察细菌形态发现,1 mM的DANA作用下P.gingivalis细菌悬液中细菌形态正常,细胞壁和细胞膜结构完整,其与未经处理的P.gingivalis的细胞结构相似。4、与对照组比较,实验组fimA、fimR和fimS基因mRNA表达分别下降76.34%±6.59%、42.55%±6.77%和50.02%±5.24%,组间差异均有统计学意义。实验组和对照组的Kgp活性的OD值分别为0.53±0.02和0.62±0.03;Rgps活性的OD值分别为0.72±0.07和0.96±0.08,实验组Kgp和Rgps活性均低于对照组,差异具有统计学意义。实验组与对照组的LPS活性相比无显著性差异。结论:浓度为1 mM的DANA可显著抑制P.gingivalis唾液酸酶活性,影响P.gingivalis的生长及生物膜的形成,降低菌毛基因的表达,影响牙龈素的活性,有望成为预防及治疗慢性牙周炎的新型药物。