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分离与鉴定目的基因是研究基因结构、揭示基因功能和信号调控运输的基础,因此,克隆功能基因成为了生物科学领域研究的一个热点。本研究从麒麟瓜叶子中提取出m RNA为试验材料,通过RACE-PCR方法首次在麒麟瓜中克隆出了Rab18基因(Gen Bank登录号:KM235552.1)和BURP domain-containing protein17基因(Gen Bank登录号:KM235553.1),并在此基础上,依据生物信息学工具初步分析了两个基因的蛋白序列特性,为后续深入研究两个基因在西瓜中的功能奠定基础,也为克隆西瓜功能基因提供了一种新的方法。主要试验方法和结论如下:1.根据西瓜EST数据库中的已有序列,采用RACE-PCR的方法首次获得Rab18基因的全长c DNA序列1010bp,包含645bp开放阅读框,编码214个氨基酸。利用Protparam软件对其理化性质进行分析,可知Rab18蛋白的等电点为5.97,分子量为23762.12。利用EXPASY提供的软件分析,结果表明Rab18蛋白不具有疏水性,是一类不含有信号肽的非跨膜蛋白,其蛋白序列二级结构由26.64%α-螺旋,30.37%延伸链,9.35%β-转角,33.64%随机卷曲组成。通过Clustal W软件进行序列同源性比对及进化树分析,结果显示西瓜Rab18基因与其他物种的氨基酸序列如黄瓜、甜瓜、桑葚、番茄、葡萄及马铃薯等有高度的同源性,分别为99%、98%、90%、89%、89%、88%。利用实时荧光定量分析显示,西瓜Rab18基因在根、茎、叶中表达量较高,在花中表达量适度,在果实中表达量较弱。2.根据西瓜EST数据库中的已有序列,并通过RACE-PCR的方法首次获得BURP domain-containing protein 17基因的全长1085bp c DNA序列1085bp,包含开放阅读框996bp,编码331个氨基酸,利用Protparam软件对其理化性质进行分析,可得BURP domain-containing protein 17基因的等电点为6.89,分子量为37446.12。利用EXPASY提供的软件分析,BURP domain-containing protein 17蛋白具有疏水区域,是一类含有信号肽的跨膜蛋白,其蛋白序列二级结构由24.77%α-螺旋,19.94%延伸链,7.55%β-转角,47.73%随机卷曲链。通过Clustal W软件进行同源比对及进化树分析,结果表明西瓜BURP domain-containing protein 17基因与其他物种的氨基酸序列如黄瓜、甜瓜、苹果、大豆及葡萄等有高度的同源性,分别为82%、82%、58%、57%、54%。利用实时荧光定量分析显示,西瓜BURP domain-containing protein 17基因在根、茎中表达量较高,在花、叶中表达量适度,在果实中表达量较弱。