肿瘤细胞能够逃离免疫系统的识别和杀伤，该过程主要通过直接杀伤效应性免疫细胞和诱导免疫抑制性微环境这两种方式来实现。外泌体是一类直径在30-100nm左右的膜结构小体，其中含有来源于供体细胞的蛋白质、DNA和RNA等多种物质。研究表明，肿瘤来源的外泌体在肿瘤细胞逃离免疫识别和杀伤中起着非常重要的作用。然而，其具体机制尚未完全明确。已有实验室发现，肿瘤来源外泌体可以清除体内CD8+T细胞，从而抑制机体免疫系统对肿瘤的清除作用。而肿瘤外泌体对CD4+ T细胞有何影响以及其具体机制是什么还鲜有报道。为了研究肿瘤外泌体对CD4+ T细胞的影响，首先，我们利用超速离心的方法从小鼠黑色素瘤细胞B16的培养上清中分离出外泌体，在体外与分离出的小鼠CD4+ T细胞共培养。结果发现，B16来源的外泌体可以抑制CD4+T细胞在体外的生长，促进其发生凋亡。与此同时，小鼠体内实验也表明，肿瘤外泌体可以诱导CD4+T细胞的凋亡，并且促进肿瘤细胞在体内的生长。然而，当我们利用CRISPER-CAS9技术阻断肿瘤细胞外泌体的释放时，肿瘤细胞在体内的生长被明显抑制，而且肿瘤微环境的T细胞的比例也明显增多。以上结果表明，肿瘤来源外泌体可以促进CD4+T细胞的凋亡，并且促进肿瘤细胞在体内的生长。　　在研究肿瘤外泌体是如何促进的CD4+T细胞凋亡的过程中，我们发现CFSE标记的肿瘤外泌体可以进入到 T 细胞中，而当我们将外泌体的膜结构破坏之后，其诱导T细胞凋亡的能力显著降低，这表明肿瘤外泌体可能通过携带某种内容物进入T细胞从而促进T细胞凋亡。利用流式以及Western分析了肿瘤外泌体处理后的CD4+T细胞中的蛋白水平后，我们发现肿瘤外泌体能够促进T细胞表面Fas蛋白的表达，而且可以促进细胞内Caspase3、Caspase7和Caspase9的活化。更重要的是，当我们利用 Caspase 抑制剂抑制了 Caspase 家族蛋白的活化后，肿瘤外泌体促进CD4+T细胞凋亡的作用明显降低，这表明肿瘤外泌体激活了CD4+T内某种凋亡通路。考虑到microRNA在肿瘤外泌体中发挥的重要作用，我们猜测肿瘤外泌体是否通过其中包含的miRNAs促进CD4+ T细胞的凋亡。因此我们利用小RNA测序技术分析了肿瘤外泌体中miRNAs的表达谱，结果显示，与正常细胞来源的外泌体以及 B16 细胞本身相比，B16 细胞来源的外泌体中高表达一些miRNAs，例如miR690，miR677，miR1957a等。在对这些高表达的miRNAs的靶基因进行分析后，我们发现一些线粒体凋亡途径中的凋亡抑制基因，例如Bcl-2， Mcl-1，Bcl-xL，可能是这些miRNAs共同的靶基因。Western结果显示，肿瘤外泌体可以降低这些蛋白在CD4+ T细胞中的水平；与此同时，luciferase实验表明miR690可以靶向Bcl-2的3’UTR。这些结果意味着肿瘤外泌体中的miRNAs可以通过靶向线粒体凋亡途径中的凋亡抑制基因。　　综合以上结果，我们发现肿瘤外泌体可以通过miRNAs共同靶向Bcl-2，Bcl-xL， Mcl-1等凋亡抑制基因促进CD4+T细胞的凋亡，从而促进肿瘤细胞在体内的生长。