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背景:外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(peripheral Blood Neutrophil-to-lymphocyte ratio,p NLR)作为全身炎症反应指标,已在多种恶性肿瘤中表现与患者预后相关。肿瘤微环境中中性粒细胞、淋巴细胞及肿瘤浸润的中性粒细胞与淋巴细胞比值(Tumor-infiltrating neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)更加能够反应患者局部免疫炎症反应。大量研究表明免疫细胞在多种恶性肿瘤中表达与患者预后相关。免疫评分(Immunoscore)首次在结直肠癌中提出,对结直肠癌术后无病生存期(Disease Free Survival,DFS)和总生存期(Overall Survival,OS)具有较好的判断价值,近年来在结直肠癌及其他肿瘤预后方面的应用越来越多,本研究探讨结直肠癌中CD66b、CD3、CD8的表达及NLR、免疫评分与预后关系,为结直肠癌患者提供新的判断预后的方法,并为其在细胞免疫治疗提供理论依据。方法:1.分别收集安徽医科大学第一附属医院普外科2005年1月至2006年4月210例结直肠癌患者手术切除的病理标本,所有病例临床病理及术后随访资料完整;并将艾滋病、梅毒及自身免疫性疾病患者予以排除,所有患者术前均未接受放化疗等任何抗肿瘤治疗。2.实验方法和结果判定:使用免疫组织化学染色法(SP法)检测结直肠癌组织中CD66b、CD3和CD8的表达。CD66b、CD3和CD8组织均定位于细胞膜,棕褐色或棕黄色为阳性细胞,按照阳性细胞数及位置判定CD66b、CD3、CD8、NLR和免疫评分对患者预后影响。3.统计学方法:所有研究数据均采用SPSS19.0软件进行统计学分析。所有正态分布数据采用均数±标准误表示,非正态数据采用中位数和范围表示。不同组别之间差异采用χ2检验和t检验。连续变量之间关系采用Pearson及Spearman等级相关分析。不同组别之间生存率的差异采用Kaplan-Meier生存分析,并进行Log-rank建议;预后多因素采用Cox比例风险模型。不同分子指标的敏感性和特异性通过受试者工作特性曲线(receiver operating characteristic curve,简称ROC曲线)评估。P<0.05为显著性检验水准。结果:1第一部分1.1结直肠癌组织中CD66b、CD3表达量明显低于癌旁组织(P<0.001)。癌巢CD66b、CD3的表达无明显相关性(r=﹣0.015,P=0.832),同时癌旁CD66b、CD3的表达也无明显相关性(r=﹣0.106,P=0.124)。但CD66b的癌巢及癌旁的表达一致性较高(r=0.877,P<0.001),CD3的癌巢及癌旁的表达一致性也同样较高(r=0.903,P<0.001)。1.2结直肠癌标本中癌巢及癌旁的CD66b与患者临床病理因素均无相关性(P>0.05)。癌巢及癌旁的CD3与淋巴结转移及TNM分期有相关性(P<0.05),此外,癌旁的CD3与肿瘤浸润深度有相关性(P<0.05),与余临床病理因素无相关性(P>0.05)。癌巢及癌旁的NLR与淋巴结转移及TNM分期有相关性(P<0.05),此外,癌巢的NLR与肿瘤分化有相关性(P<0.05),与余临床病理因素无相关性(P>0.05)。1.3生存分析发现,结直肠癌巢及癌旁的CD66b和NLR与患者DFS及OS均呈负相关(P<0.05)。而癌巢及癌旁的CD3与患者无病生存期和总生存期均呈正相关(P<0.05),但癌巢CD3的表达与DFS无明显相关(P=0.051)。多因素分析显示:癌旁NLR、肿瘤分化程度及TNM分期均是结直肠癌的独立危险因素,且癌旁NLR具有较高的风险比。1.4对TNM分期中的Ⅱ期患者单独做生存分析发现,癌巢及癌旁NLR与患者DFS和OS呈明显负相关(P<0.05)。2第二部分2.1CD8的表达与CD3呈显著性正相关(r=0.406,P<0.001)。同时CD8的表达与CD66b呈显著性负相关(r=-0.259,P<0.001)。此外,CD3的表达与CD66b无明显相关性(r=-0.020,P=0.770)。2.2结直肠癌标本中癌巢的CD66b仅与肿瘤分化程度有关(P=0.044),而与其他临床病理因素均无相关性(P>0.05)。CD3和CD8与侵犯深度、淋巴结转移及TNM分期有相关性(P<0.05),此外,CD8与肿瘤分化程度有相关性(P<0.05),与余临床病理无相关性(P>0.05)。免疫评分与肿瘤的侵犯深度、淋巴结转移及TNM分期均有相关性(P<0.05),与余临床病理无相关性(P>0.05)。2.3单因素分析显示:结直肠癌癌巢的CD66b、CD8和Immunoscore与患者DFS均有相关性(P<0.05)。提示CD66b越低,CD8和Immunoscore越高,患者DFS越长。但CD3表达情况与患者DFS无关(P=0.05)。CD66b、CD3、CD8和Immunoscore与患者OS均有相关性(P<0.05)。单因素分析还发现:肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期也是患者预后的独立危险因素。此外,肿瘤的侵犯深度与患者OS明显相关(P=0.015,CI:1.177-4.611)。2.4多因素分析显示:Immunoscore和TNM分期均是结直肠癌的独立危险因素,但Immunoscore具有更高的风险比。进一步采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,简称ROC曲线)显示:Immunoscore较TNM分期对患者5年DFS(c-index:0.750 vs 0.701)和5年OS(c-index:0.772 vs 0.754)预后判断更加准确。结论:1肿瘤浸润的CD66b+中性粒细胞、CD3+淋巴细胞和CD8+淋巴细胞在肿瘤局部免疫炎症反应中起重要作用,对结直肠癌预后方面有重要意义。2肿瘤相关的NLR是结直肠癌患者预后的独立影响因素,且具有较高的风险比,对鉴别高风险患者具有警示作用。3免疫评分是结直肠癌术后患者预后的独立影响因素,对患者预后判断优于TNM分期。