论文部分内容阅读
胶质瘤是神经系统中最常见的原发恶性肿瘤,尤其是胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme, GBM)治疗效果差,复发率高,平均生存期短,是神经外科临床工作中的难点之一。尽管近年来有手术、放疗、化疗及靶向治疗等多种治疗方法的进步,胶质瘤患者的预后仍然不佳,其主要原因还是与胶质瘤细胞的快速生长及侵袭性强有关。主要方法、研究结果及结论如下：1.我们运用生物信息学技术检索了癌症基因组图谱(TCGA)数据库,筛选出518例胶质母细胞瘤资料,其中包括142例经典型,85例神经元型,136例前神经元型以及155例间充质型。相对其他类型的GBM亚型,间充质型的miRNA-181c表达是明显下调的(P<0.01)。进而我们发现,在GBM患者中,高表达miRNA-181c患者的中位生存期明显长于低表达者(452天vs.372天,P<0.05)。单因素及多因素的回归分析均证实了miRNA-181c是GBM的独立预后因素。2.miRNA-181c在U87细胞神经球中表达明显下调,并且抑制了肿瘤细胞的增殖和侵袭。(1)对比U87神经球和U87单层细胞,我们发现神经球中的miRNA-181c表达明显降低(P<0.01)。(2)在转染miRNA-181c mimic后,U87神经球和U87细胞均有不同程度的miRNA-181c表达增加。(3)在48h和72h时间点,用miRNA-181c mimic转染后的U87细胞增殖被明显抑制(P<0.01)。(4)体外Transwell小室侵袭实验发现,与对照组相比,转染了miRNA-181c mimic的U87细胞侵袭能力明显减弱(P<0.05)。3. miRNA-181c减弱了胶质瘤细胞的自我更新能力。(1)通过运用有限稀释法研究,由miRNA-181c mimic转染的U87细胞神经球体积和数量都明显小于对照组,表明其成球能力减弱。(2)转染了miRNA-181c mimic的U87细胞克隆形成数量明显减少(P<0.01),说明其克隆形成能力亦被减弱。4.miRNA-181c在胶质瘤细胞中下调Notch2的表达。(1)运用生物信息学预测方法,分析了5个miRNA预测数据库,筛选出Notch2, HOXA1以及Smad7这3个重要基因。(2)RT-PCR结果表明,Notch2在转染了miRNA-181c mimic的胶质瘤细胞中表达明显降低,证明其为关键基因。(3)进一步我们发现,在U87细胞神经球中,Notch2 mRNA是明显上调的(P<0.01),而转染了miRNA-181c mimic的胶质瘤细胞中Notch2 mRNA表达明显降低(P<0.01)。(4)采用Western blot方法证实,在U87细胞及成球细胞中,miRNA-181c都能够减少Notch2的蛋白含量,表明miRNA-181c可以抑制Notch2蛋白的表达。(5)我们获取了10例胶质瘤病理标本,并通过RT-PCR研究其中miRNA-181c与Notch2的关系。线性回归模型证明了miRNA-181c与Notch2呈负相关关系。(P<0.05,R2=0.5728).本文的结论如下：癌症基因组图谱(TCGA)是一种研究胶质瘤的有效方法,miRNA-181c是GBM的独立预后因素,可以用作判断GBM预后的指标；miRNA-181c能够抑制GBM肿瘤细胞的增殖、侵袭和自我更新能力；miRNA-181c能够在抑制GBM进展的过程中发挥重要作用,其调控作用的发挥可能主要依赖Notch2信号通路的阻断。