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作为心肌梗死和心力衰竭的一种治疗手段,细胞移植在过去的10年里逐渐引起了人们的注意。目前已经有很多细胞被用作心肌内细胞移植的供体,包括心肌细胞、平滑肌细胞、胚胎干细胞、骨髓干细胞(bone marrow stem cells, BMSCs)、骨骼肌成肌细胞、肝脏干细胞等。其中骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有自体移植无免疫排斥反应,无伦理道德的争议,取材容易制备简单等优点,是最有前景的一类心肌内细胞移植供体。到目前为止,已有大量基础实验和临床研究证实了MSCs移植用于治疗缺血性心肌病的可行性。本研究将MSCs自体移植到兔扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM),并观察其在DCM微环境中的增殖分化情况及对心功能的保护作用。 目的:研究MSCs体内外分化为心肌样细胞的可行性及条件;研究MSCs自体移植到兔扩张型心肌病后对心功能的影响。 方法:体外部分于无菌条件下骨穿抽取兔胫骨骨髓,分离骨髓间充质干细胞接种培养,并于培养第3天加入诱导剂5-氮胞苷(5-azacytiding, 5-aza)10μmol/L作用24h,培养观察14d后,采用免疫细胞化学方法检测被诱导细胞心肌肌钙蛋白T和α-肌动蛋白的表达,未加5-aza诱导组为对照组。体内部分将健康日本大耳白兔46只随机分为4组:(1) DCM细胞移植组(n=12);(2) DCM对照组(n=12);(3) DCM假手术组(n=12);(4) 正常对照组(n=10)。分离培养DCM细胞移植组MSCs后,前三组动物用盐酸阿霉素建立兔扩张型心肌病(DCM)模型,第四组注射等量生理盐水。模型建立成功后第三周,将5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的MSCs自体移植到细胞移植组心肌内,对照组注射培养基,假手术组只开胸,不做注射。细胞移植4周后采用超声心动图检测心脏结构和功能,利用左心导管测定左室压力变化,随后处死动物取左室移植区域心肌组织做冰冻切片,进行BrdU、心肌特异性肌钙蛋白T(Troponin T)、Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光染色以观察移植细胞的增殖分化情况。另选部分心肌组织做HE染色查看各组动物心肌组织形态学改变。 结果:① 原代培养中,骨髓间充质干细胞贴壁生长,贴壁后成为纺锤形、梭形的成纤维细胞形态,均以分散的克隆集落的形式增殖;② 5-氮胞苷诱导的细胞形态与心肌细胞形态相似,且心肌肌钙蛋白T和α-肌动蛋白均染色阳性;③ 与正常