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第一部分异丙酚对缺血性脑损伤鼠海马神经元增殖的影响目的本研究旨在通过利用缺血性脑损伤沙土鼠模型,对异丙酚影响海马神经元增殖进行在体研究,观察异丙酚能否促进成年鼠海马神经元的增殖,以及影响海马神经元增殖的剂量效应和时间效应,为临床研究并合理使用异丙酚提供理论依据,并为进一步研究异丙酚在缺血性脑损伤鼠的促神经元增殖机制提供依据。方法成年沙土鼠40只,随机分为5组:假手术对照组(不夹闭颈总动脉)、缺血对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min)、10 mg/kg异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射异丙酚10 mg/kg/12h,连续9天)、50 mg/kg异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射异丙酚50 mg/kg/12h,连续9天)和100 mg/kg异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射异丙酚100 mg/kg/12h,连续9天)。每组各8只。各组又分为4个观察时间点,分别在缺血1天、缺血8天、缺血15天和缺血22天随机抽取2只,腹腔注射BrdU 100 mg/kg/12h,连续2天后灌注取脑,制作海马脑片,行海马BrdU免疫组织化学染色。观察并记录各组脑片海马齿状回的BrdU阳性细胞数。结果1)与假手术对照组比较,缺血对照组、10mg/kg异丙酚组、50 mg/kg异丙酚组和100 mg/kg异丙酚组的海马齿状回BrdU阳性细胞数无明显变化。2)缺血对照组海马齿状回BrdU阳性细胞数在缺血后第10天开始增多(P＜0.05),缺血后第17天最多(P＜0.05);与缺血对照组比较,10 mg/kg异丙酚组海马齿状回BrdU阳性细胞数,在缺血后第10天明显增多(P＜0.05),且明显高于缺血对照组缺血后第17天的BrdU阳性细胞数(P＜0.05),BrdU阳性细胞数峰值时间提前至缺血后第10天。3)与同组缺血后第3天比较,50 mg/kg异丙酚组和100 mg/kg异丙酚组其他各时间点的海马齿状回BrdU阳性细胞数明显增多(P＜0.05);50 mg/kg异丙酚组和100 mg/kg异丙酚组的海马齿状回BrdU阳性细胞数,与缺血对照组同时间点比较,在缺血后第10天和缺血后第24天无明显变化,在缺血后第17天则明显减少(P＜0.05);但与10 mg/kg异丙酚组相同时间点比较,缺血后第10天、17天和24天50 mg/kg异丙酚组和100 mg/kg异丙酚组的海马齿状回BrdU阳性细胞数均明显减少(P＜0.05)。结论缺血性脑损伤诱发的神经元增殖在缺血后第17天时最明显;腹腔注射10 mg/kg/12h异丙酚可促进缺血性脑损伤沙土鼠海马神经元增殖,且使神经元增殖峰值时间提前至缺血性脑损伤后第10天;但腹腔注射50 mg/kg/12h与100 mg/kg/12h异丙酚对缺血性脑损伤诱发的海马神经元增殖有抑制作用。第二部分异丙酚促进缺血性脑损伤鼠海马神经元增殖的受体机制目的利用缺血性脑损伤沙土鼠模型,通过观察异丙酚及GABA_A受体阻断剂、NMDA受体阻断剂对海马神经元增殖的影响及海马内氨基酸递质的变化,探讨异丙酚促进缺血性脑损伤海马神经元增殖的受体机制。方法成年沙土鼠60只,随机分为10组:假手术对照组(不夹闭颈总动脉,腹腔注射生理盐水10 ml/kg/12h)、缺血对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射生理盐水10 ml/kg/12h)、脂肪乳对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射脂肪乳10 ml/kg/12h)、荷包牡丹碱对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2 mg/kg/12h)、MK801对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射MK801 0.5 mg/kg/12h)、荷包牡丹碱+MK 801对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2 mg/kg/12h+MK801 0.5 mg/kg/12h)、异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射异丙酚10 mg/kg/12h)、荷包牡丹碱+异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2mg/kg/12h+异丙酚10 mg/kg/12h)、MK 801+异丙酚组(同时夹闭双侧夹闭颈总动脉10 min,腹腔注射MK801 0.5 mg/kg/12h+异丙酚10 mg/kg/12h)和荷包牡丹碱+MK 801+异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2 mg/kg/12h+MK801 0.5 mg/kg/12h+异丙酚10 mg/kg/12h),每组6只,各组均连续9天腹腔注射相应药物。每组又随机分为BrdU小组和氨基酸小组,每小组3只。BrdU小组沙土鼠在缺血后第8天开始腹腔注射BrdU 100mg/kg/12h,连续2天后灌注取脑,制作海马脑片,行BrdU免疫组织化学染色,观察并记录各组脑片海马齿状回的BrdU阳性细胞数。氨基酸小组沙土鼠在缺血后第10天取海马用高压液相色谱法检测海马组织中天冬氨酸、谷氨酸;甘氨酸、γ氨基丁酸递质的含量。结果1)与假手术对照组比较,缺血对照组的海马齿状回BrdU阳性细胞数无明显变化;与缺血对照组比较,脂肪乳对照组、荷包牡丹碱对照组、MK801对照组以及荷包牡丹碱+MK801对照组海马齿状回BrdU阳性细胞数无明显变化。2)与缺血对照组比较,异丙酚组海马齿状回BrdU阳性细胞数显著增多(P＜0.05)。3)与异丙酚组比较,荷包牡丹碱+异丙酚组、MK801+异丙酚组和荷包牡丹碱+MK801+异丙酚组海马齿状回BrdU阳性细胞数显著减少(P＜0.05);与缺血对照组比较,荷包牡丹碱+异丙酚组、MK801+异丙酚组和荷包牡丹碱+MK801+异丙酚组海马齿状回BrdU阳性细胞数无明显变化。4)海马组织天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和γ氨基丁酸递质含量,各组间比较无明显差异。结论腹腔注射10 mg/kg/12h异丙酚可促进缺血性脑损伤沙土鼠海马神经元增殖,且其促进海马神经元增殖作用可被GABA_A受体阻断剂荷包牡丹碱、NMDA受体阻断剂MK801逆转。腹腔注射10 mg/kg/12h异丙酚对沙土鼠缺血性脑损伤后第10天的海马氨基酸递质含量无明显影响。第三部分异丙酚对缺血性脑损伤鼠海马GABA_A受体mRNA表达的影响目的利用缺血性脑损伤沙土鼠模型,通过使用异丙酚及GABA_A受体阻断剂、NMDA受体阻断剂,观察腹腔注射10 mg/kg/12h异丙酚对海马GABA_A受体mRNA表达的影响,并观察分别和同时阻断GABA_A受体、NMDA受体时异丙酚对GABA_A受体mRNA表达影响的变化,探讨异丙酚促进缺血性脑损伤海马神经元增殖的可能机理。方法成年沙土鼠30只,随机分为10组:假手术对照组(不夹闭颈总动脉,腹腔注射生理盐水10 ml/kg/12h)、缺血对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射生理盐水10 ml/kg/12h)、脂肪乳对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射脂肪乳10ml/kg/12h)、荷包牡丹碱对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2 mg/kg/12h)、MK801对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射MK801 0.5 mg/kg/12h)、荷包牡丹碱+MK 801对照组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2 mg/kg/12h+MK801 0.5 mg/kg/12h)、异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射异丙酚10 mg/kg/12h)、荷包牡丹碱+异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2mg/kg/12h+异丙酚10 mg/kg/12h)、MK 801+异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射MK801 0.5 mg/kg/12h+异丙酚10 mg/kg/12h)和荷包牡丹碱+MK801+异丙酚组(同时夹闭双侧颈总动脉10 min,腹腔注射荷包牡丹碱2mg/kg/12h+MK801 0.5 mg/kg/12h+异丙酚10 mg/kg/12h),每组3只,各组均连续9天腹腔注射相应药物。缺血后第10天取海马进行GABA_A受体mRNA的实时荧光定量RT-PCR检测。结果1)与假手术对照组比较,缺血对照组、脂肪乳对照组、荷包牡丹碱对照组、MK801对照组、荷包牡丹碱+MK801对照组的GABA_A受体mRNA的相对表达倍数无明显变化。2)与缺血对照组比较,异丙酚组的GABA_A受体mRNA的相对表达倍数明显升高(P＜0.05)。荷包牡丹碱+异丙酚组、MK801+异丙酚组和荷包牡丹碱+MK801+异丙酚组GABA_A受体mRNA的相对表达倍数,虽然与缺血对照组比较,无明显变化;但明显低于异丙酚组(P＜0.05)。结论腹腔注射10mg/kg/12h异丙酚可明显上调缺血性脑损伤沙土鼠GABA_A受体mRNA的表达,且此作用可被荷包牡丹碱和MK801逆转。