水稻小G蛋白RAB5在耐盐中的功能研究及温敏型白化突变体tsa1的表型鉴定和初定位

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本文包含两个研究课题,即水稻小G蛋白RAB5在耐盐中的功能研究及温敏型白化突变体tsa1的表型鉴定和初定位。已有研究报道,拟南芥RAB5家族基因ARA6在应答盐胁迫时发挥调节功能,在水稻中也发现与ARA6高度同源的基因RAB5b/d。为了进一步研究水稻中RAB5同源基因在抗盐中的功能,通过盐胁迫处理过表达RAB5b/dCA(组成型激活态)的转基因拟南芥,发现了 RAB5b/dCA能增强植株对于盐胁迫的耐受能力。通过烟草瞬时表达,发现RAB5b/dCA与质膜marker AtPIP2A共定位,表明RAB5b/d介导由内体到质膜的囊泡运输途径,与传统型RAB5小G蛋白RAB5a介导的囊泡运输途径不同,但是RAB5b/dwT(野生型)又与晚期内体PVC的marker AtVSR2共定位,表明RAB5b/d不仅介导内体到质膜的运输途径,还具有额外的功能。进一步研究发现RAB5b/d与质膜定位的Na+/H+反向转运子OsHKT1共定位,我们推测RAB5b/d通过调控OsHKT1等应答盐胁迫蛋白的运输,从而参与到水稻的抗盐中。虽然人们对水稻抗盐进行了积极的研究,但水稻的抗盐机制还远未被解析,例如囊泡运输和水稻抗盐性之间的关系几乎是一个研究空白。为了给水稻遗传改良提供更好的理论依据,本课题研究具有重要的意义。本文还发现一个由甲磺酸乙酯(EMS)诱变水稻品种宁粳36号获得的温敏型白化突变体tsa1该突变体在低温条件下(20-24℃)表现为叶片白化,但在较高温度下(28-32℃)叶片叶色与野生型无显著差异。突变体白化叶片中叶绿素a和类胡萝卜素含量与野生型相比显著下降。显微观察发现突变体白化组织中正常叶绿体数量稀少,含有大量小型的结构异常的叶绿体,进一步用透射电镜观察发现异常叶绿体中无发育完整的类囊体片层结构,表明该突变体中叶绿体发育存在严重缺陷。遗传分析表明该突变性状受单个隐性核基因控制。利用tsa1与南京11杂交所得的F2群体中的368个隐性极端个体,将该突变基因定位于第5号染色体长臂163kb的范围内。本研究为该基因的图位克隆及功能解析奠定了工作基础。
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