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目的 新生儿窒息是围产期常见的、对新生儿危害极大的一种疾病。该病可以发生在宫内及娩出过程中的各个环节。窒息可导致新生儿多系统的损伤。有研究发现窒息后腹腔动脉血流减少70%,从而导致胃肠道严重缺血,特别是胃肠黏膜的缺血,可造成胃肠黏膜的损伤如糜烂、溃疡和出血等,更严重的是肠道缺氧可能导致坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)的发生。 研究表明急性胃肠黏膜损伤后,一些生长因子参与了一系列的修复过程。表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)是其中一个重要的成员,EGF与其受体(表皮生长因子受体,epidermal growth factor receptor,EGFR)结合后激活EGFR,从而调节生长代谢。EGF及EGFR对促进胃肠道发育和成熟、抑制胃酸分泌、保护胃肠细胞、减轻胃肠黏膜损伤并促进其修复有重要意义。 目前有关宫内窒息新生鼠胃肠道EGF和EGFR改变的研究尚未见报道。我们对足月胎鼠进行宫内窒息后取出并让其生存,来研究窒息后新生鼠胃肠道EGF和EGFR随时间不同而发生的改变以了解窒息后新生鼠胃肠损伤修复的机制,从而为防治新生儿窒息后消化系统损伤提供理论依据。 方法 一、动物模型制备 孕21天Wistar大鼠乙醚麻醉后,下腹正中开腹,暴露双角子宫及供应子宫和卵巢的动静脉血管,以无创动脉夹钳夹一侧血管20分钟,对侧末钳夹宫角内的胎鼠为对照组(假手术组人模型达规定时间后立即剖宫取出胎鼠,给予保温、吸口腔内新液、吸氧等处理后用代乳鼠进行喂养。将存活的新生鼠按生后0在4/8*2/J’时分为4个组,达规定时间后断头处死,取出胃和肠标本。 二、检测方法 应用免疫组化法检测胃、肠组织 EGF和 EGFR的表达,同时常规做光镜检查以了解组织学改变。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃组织 EGFR mRNA的表达。所有数据用二。SD表示,应用SPSS软件行q检验,P<0.05时被认为差异显著。 结 果 (U正常新生鼠胃肠部膜*胜主要位于细胞浆,胞膜亦可见到少量表达。窒息后新生鼠胃肠荡膜EGF平均灰密度值随生存时间增加而增加,于48小时达高峰,然后开始下降。对照组则无明显改变。 ①正常新生鼠胃肠我膜*辟R主要位于细胞膜,胞浆亦可见到少量表达。窒息后新生鼠胃肠猪膜EGFR平均灰密度值在窒息0小时组明显减少,之后随生存时间增加而增加,于48小时达高峰,然后开始下降。对照组则无明显改变。 ①窒息后新生鼠胃新膜EGFR mRNA半定量值在窒息0/J’时明显减少,于生后24小时达高峰,然后开始下降。对照组则无明显改变。 M光镜结果: ①窒息后新生鼠胃秩膜改变:窒息后0小时组与对照组相比基本未发生改变。窒息后24小时组可见表面上皮水肿并附有少量炎性渗出物,间质略充血。窒息后48小时组改变最重,胃薄膜水肿变性,部分上皮脱落,间质可见淋巴细胞、浆细胞和少量中性 ·二·粒细胞浸润。窒息后72小时组改变逐渐减轻,但仍可见脱落的上皮和胃新膜上皮水肿以及减少的炎性细胞。对照组则无此相应改变。 ②窒息后新生鼠肠荡膜改变:窒息后0小时组部分绒毛中轴固有层充血。窒息后24小时组绒毛数量减少,部分绒毛顶脱落,上皮细胞水肿,固有层水肿,中央乳糜管扩张。窒息后48小时组绒毛数量明显减少,部分绒毛脱落,上皮细胞肿胀、变性、坏死、脱落,固有层裸露,中轴固有层明显充血、水肿,中央乳糜管扩张。窒息后72小时组绒毛数量较对照组仍略少,部分毛细血管充血,但上皮及间质的改变已经恢复。对照组无此改变。 结论 山窒息后新生鼠胃肠荡膜EGF的表达随胃肠部膜损伤程度增加而逐渐增高,在损伤最重时达高峰,之后随损伤程度的减轻其表达亦开始下降。 ②窒息后新生鼠胃肠新膜*GF R的表达在窒息后初期减少,之后随胃肠粘膜损伤程度增加而逐渐增高,在损伤最重时达高峰,之后随损伤程度的减轻其表达亦开始下降。 间EGF和EGFR在窒息引起的新生鼠胃肠粘膜损伤后的修复中发挥重要作用。