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目的 检测宫颈原位癌、宫颈癌和正常宫颈组织中HPV16/18感染、p53基因突变以及p53、p21和mdm2的表达。结合病人临床病理资料综合分析HPV16/18感染,p53、mdm2和p21基因异常在宫颈癌发生发展中的作用,探讨宫颈癌发生过程中mdm2,p53和p21间的相互关系。 方法 应用PCR技术检测12例宫颈原位癌、45例宫颈癌和20例正常宫颈组织中HPV16/18 DNA,RT-PCR检测HPV16/18阳性标本E6基因mR-NA表达。PCR-SSCP技术检测p53基因外显子5~8的突变,同时采用RT-PCR及免疫组化技术在mRNA和蛋白水平检测p53,p21和mdm2的表达。 结果 ①宫颈原位癌和宫颈癌组织中HPV16阳性率为59.65%(34/57),HPV18阳性率为14.04%(8/57),HPV16阳性率明显高于HPV18,两者间有显著性差异(X~2=25.48,P<0.001)。②宫颈原位癌、宫颈癌和正常宫颈组织中HPV16/18阳性率分别为66.67%(8/12)、66.67(30/45)和20%(4/20),宫颈原位癌和宫颈癌组织中HPV16/18阳性率均明显高于正常宫颈组织,两两间均有显著性差异(X~2=5.12,12.09;P=0.024,0.0005)。③宫颈癌组织中HPV16/18 E6基因mRNA表达率(18/30)明显高于正常宫颈组织(0/4),两者间有显著性差异(P=0.039)。宫颈原位癌和正常宫颈组织间、宫颈原位癌和宫颈癌间E6 mRNA阳性率均无显著差异(P分别为0.208和0.698)。④45例宫颈癌标本中测得2例突变,其中exon 5突变率为2.27%(1/45),exon 7突变率为2.27%(1/45),合计突变率为4.54%,未检测到exon 6和exort 8的突变。宫颈原位癌和正常宫颈组织中均未检测到p53基因突变,2例突变均发生在HPV阴性宫颈癌组织。⑤宫颈原位癌、宫颈癌和正常宫颈组织中均检测到p53 mRNA表达,统计学分析表明宫颈原位癌和宫颈癌组织中p53 mRNA的表达水平明显高于正常宫颈组织,两者间有显著性差异(t=6.263,P<0.001)。⑥宫颈原位癌、宫颈癌和正常宫颈组织中均检测到p21 mRNA表达。宫颈原位癌和宫颈癌组织中p21 mRNA的表达水平明显低于正常宫颈组织,两者间有显著性差异(t=4.736,P<0.001),p21 mRNA的表达水平与肿瘤组织分化程度和淋巴结转移有关(p分别为0.004和0.008)。⑦宫颈原位癌组织中p53,p21和mdm2 中文摘要蛋白阳性率分别为25%、75%和42.67%;宫颈癌组织中p53,p21和mdmZ蛋白阳性率分别为42.22写、42.22%和53.33%。宫颈原位癌和宫颈癌组织中p53和mdmZ蛋白的阳性率明显高于正常宫颈组织(P均<0.005),而宫颈原位癌和宫颈癌组织中pZI蛋白阳性率明显低于正常宫颈组织(丫一16.32,尸<。.0001)。⑧结合临床病例资料综合分析,p53蛋白的表达与宫颈癌病理分期有显著相关性(尸一0.042),p21蛋白表达与细胞分化程度、淋巴结转移明显相关(尸一0.031,0.048)。⑨22例p53蛋白阳性宫颈原位癌和宫颈癌组织中有17例同时检测到mdmZ的表达,两者间有显著相关性(xz一9.988,尸=0.0016),P53和p21蛋白的表达无明显相关(丫一0.011,尸一0.916)。 结论①HPV16/18感染尤其是E6基因的表达与官颈癌的发生密切相关。②宫颈癌组织中p53基因突变率较低,提示p53基因突变并非宫颈痛组织中p53蛋白异常表达的主要原因,HPV感染和mdmZ的过表达可能导致p53功能异常。③宫颈原位癌和宫颈癌组织中P53和mdmZ蛋白的表达明显高于正常宫颈组织,而p21蛋白的表达明显低于正常宫颈组织,提示p53,pZI和mdmZ蛋白表达异常参与宫颈癌的发生。④结合病人临床病理资料综合分析显示,p53蛋白的异常表达与宫颈癌临床分期明显相关,pZI蛋白的异常表达与淋巴结转移和宫颈癌组织分化程度明显相关,提示P53和p21蛋白的异常表达可作为预测宫颈癌发展及其预后有意义的指标。⑤p53蛋白异常表达的宫颈原位癌和宫颈癌组织中多伴有mdmZ表达,推测mdmZ蛋白可能通过干扰野生型p53的功能参与宫颈癌的发生。⑥宫颈原位癌和宫颈癌组织中p21和p53蛋白表达无明显相关性,提示宫颈癌组织中p21的诱导表达存在p53依赖型和p53非依赖性两种途径。