【摘 要】
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对原核表达质粒pET3C进行改建,消去载体上非必需的EcoR I 、HindIII限制酶位点,在后在克隆位点BamH I处引入LacZ片段,经此二步改建后的载体命名为pJN982.该载体保留了pET3c高
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对原核表达质粒pET3C进行改建,消去载体上非必需的EcoR I 、HindIII限制酶位点,在后在克隆位点BamH I处引入LacZ片段,经此二步改建后的载体命名为pJN982.该载体保留了pET3c高效表达外源基因的能力,同时,其融合克隆位点由1个增至8个,并获得以目视法筛选重组子的能力.应用该载体在E.coli BL<,21>(DE3)pLysS中融合表达牛碱性成纤维细胞生长因子(B-bFGF),表达量占菌体总蛋白30.04﹪,在摇瓶试验的基础上,对BL<,21>[pJN-BbFGF]的发酵条件进行了研究,以变速流加葡萄糖高密度分批发酵工艺经10hr发酵可以获得菌体光密度为30.7,bFGF表达量为95mg/L的发酵液.破碎菌体,上清经阳离子交换柱、肝素亲和柱两步层析得纯度为95﹪的重组BbFGF收白.纯化产物活性检测显示,重组蛋白具有与非融合hbFGF一致的促有丝分裂活性;地高辛记探针Dot-blotting检测结果表明,纯化产物NDA残留量小于100pg/每剂量.
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