目的：金水宝胶囊（每粒含虫草菌粉0.33g）系冬虫夏草分离所得虫草菌的发酵制品。冬虫夏草甘温，入肺、肾经，具有补肾保肺、秘精益气之功效，对慢性支气管炎（chronic bronchitis，CB）具有较好的治疗效果，但其治疗作用机制尚未完全明确。本研究采用气管内滴注脂多糖（LPS）的方法复制CB大鼠模型，然后给予药物干预，检测大鼠血清、肺组织中促炎细胞因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β）及抗炎细胞因子IL-4、IL-10的含量变化，运用HE染色和SP免疫组织化学染色等技术手段，观察CB状态下支气管、肺组织病理形态学特征及金水宝胶囊对肺组织中cNOS表达的影响，探讨其作用机理。　　 方法：SD大鼠40只，按体重随机分为正常对照组（对照组，normal group）、CB模型组（模型组，model group）、金水宝低剂量组（低剂量组，low-dose group）、金水宝高剂量组（高剂量组，high-dose group）和桂龙咳喘宁对照组（桂龙组，guilong group，阳性对照用药）。每组8只，雌雄各半。　　 各组大鼠用1％的戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔注射，麻醉成功后，使其仰卧固定于操作台，暴露声门，以静脉套管针代替气管导管，拔除针芯，快速插入气管，将LPS200μg注入气管内；对照组大鼠气管内滴入无菌生理盐水0.5ml/只。喂养3周。　　 从第四周开始，对照组和模型组灌服生理盐水，容量为10ml/kg；低剂量组和高剂量组每日用药剂量分别为0.3g/kg（相当于临床成人用药量的7倍）、0.6g/kg（相当于临床成人用药量的14倍），以0.03g/ml和/或0.06g/ml的混悬液灌胃；桂龙组每日用药剂量0.9g/kg（相当于临床成人用药量的14倍），以0.09g/ml的混悬液灌胃。以上均为每日1次，连续3周。　　 检测样本制备：灌药3周结束后第2天，断头取血，立即以3500r/min离心5min，取血清，-20℃冻存待检。　　 肺组织匀浆的制备：将肺组织用冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后，称取湿重0.3g左右，加入预冷的生理盐水，用电动匀浆器研磨，镜检未见完整细胞，制成10％的肺组织匀浆。4℃6000r/min离心5min，提取上清液，用双缩脲法测定蛋白含量，-20℃冻存待检。　　 取右侧肺脏中部组织0.5cm×0.5cm，用10％甲醛（pH7.4磷酸盐缓冲液配制）固定，常规石蜡包埋，切片。　　 结果：　　 1.CB大鼠支气管、肺组织病理形态学改变　　 对照组可见细支气管粘膜上皮完整，细胞排列整齐，细支气管壁及肺泡无明显病理形态学改变（见Fig.1、2、3）。模型组可见细支气管管腔增大，部分上皮细胞坏死脱落，周围可见大量以淋巴细胞为主的慢性炎细胞浸润。肺泡上皮细胞部分坏死脱落，肺泡间隔明显增宽，伴有慢性炎细胞及少量中性粒细胞浸润等（见Fig.4、5、6）。　　 2.金水宝胶囊对CB大鼠血清和肺组织中促炎细胞因子TNF-α、IL-1β含量的影响　　 2.1金水宝胶囊对CB大鼠血清和肺组织中TNF-α含量的影响　　 结果显示，与对照组（3.31±0.24，2.57±0.26）比较，模型组大鼠血清和肺组织中TNF-α含量（4.23±0.20，3.57±0.37）均明显升高（P<0.01）；与模型组比较，高剂量组血清和肺组织中TNF-α含量（3.43±0.47，3.13±0.43）均明显降低（P<0.05或P<0.01），桂龙组血清中TNF-α含量（3.69±0.21）也明显降低（P<0.05）；与低剂量组血清中TNF-α（3.91±0.50）比较，高剂量组含量也明显降低（P<0.05）。见 Table1。　　 2.2金水宝胶囊对CB大鼠血清和肺组织中IL-1β含量的影响　　 结果显示，与对照组（2.13±0.06，2.20±0.12）比较，模型组大鼠血清和肺组织中IL-1β含量（2.29±0.06，2.64±0.17）均明显升高（P<0.01）；与模型组比较，高剂量组（2.27±0.08，2.33±0.12）和桂龙组（2.27±0.07，2.45±0.09）血清和肺组织中IL-1β含量均显著降低（P<0.05或P<0.01），低剂量组肺组织中IL-1β含量也显著低于模型组（P<0.01）。各治疗组间比较，桂龙组血清和高剂量组肺组织中IL-1β含量较之低剂量组（2.29±0.07，2.48±0.08）显著降低（P<0.01），高剂量组肺组织中IL-1β含量较之桂龙组亦显著降低（P<0.05）。见 Table2。　　 3.金水宝胶囊对CB大鼠血清和肺组织中抗炎细胞因子IL-4、IL-10含量的影响　　 3.1金水宝胶囊对CB大鼠血清和肺组织中IL-4含量的影响　　 结果显示，与对照组（123.21±23.15，1.15±0.02）比较，模型组大鼠血清和肺组织中IL-4含量（44.28±18.49，1.08±0.01）均明显降低（P<0.01）；与模型组比较，高剂量组（105.36±15.63，1.14±0.02）和桂龙组（83.50±21.23，1.11±0.04）血清和肺组织中IL-4含量均显著增加（P<0.05或P<0.01），低剂量组血清和肺组织中IL-4含量也明显高于模型组（P<0.05）。各治疗组间比较，高剂量组血清中和肺组织中IL-4含量较之低剂量组（66.23±32.07，1.11±0.03）明显增加（P<0.05或P<0.01），对肺组织中IL-4含量的影响亦显著高于桂龙组（P<0.05）。见 Table3。　　 3.2金水宝胶囊对CB大鼠血清和肺组织中IL-10含量的影响　　 结果显示，与对照组（25.63±2.97，8.06±0.65）比较，模型组大鼠血清和肺组织中IL-10含量（13.38±2.26，3.36±0.95）均明显降低（P<0.01）；与模型组比较，低剂量组（20.26±4.11，5.33±0.48）和桂龙组（19.88±3.72，6.04±1.39）血清和肺组织中IL-10含量均显著增加（P<0.05），高剂量组肺组织中IL-10含量（6.38±0.79）也明显高于模型组（P<0.01）。各治疗组之间对血清和肺组织中IL-10含量的影响未见明显差异（P>0.05）。见Table4。　　 4.金水宝胶囊对CB大鼠肺组织cNOS表达的影响　　 对照组大鼠细支气管粘膜上皮细胞胞浆cNOS呈较强的阳性表达（Fig.7、8）；模型组大鼠可见细支气管粘膜上皮细胞胞浆存在较弱的cNOS阳性反应信号，动脉管壁平滑肌细胞胞浆呈较强阳性表达（Fig.9、10）。阳性信号均呈棕黄色。　　 低剂量组与桂龙组细支气管粘膜上皮细胞胞浆呈现较弱的阳性反应（Fig.11、12，15、16）；高剂量组cNOS表达呈现较强的阳性信号。与对照组相似，阳性反应主要见于细支气管粘膜上皮细胞胞浆（Fig.13、14）。　　 结论：　　 1.促炎细胞因子 TNF-α、IL-1β和抗炎细胞因子IL-4、IL-10自稳失衡，是慢性支气管炎发病的重要病理基础；　　 2.检测血清促炎细胞因子 TNF-α、IL-1β及抗炎细胞因子IL-4、IL-10水平可以作为慢性支气管炎临床诊断及评价疗效的重要依据；　　 3.CB状态下，cNOS在细支气管粘膜上皮细胞的表达受到抑制，并使内源性NO生成和释放减少，从而促进支气管收缩；　　 4.金水宝胶囊可以通过抑制促炎细胞因子的分泌，并增强抗炎细胞因子的活性，来调节促炎、抗炎细胞因子的失衡状态，恢复其自稳机制；　　 5.金水宝胶囊能有效调节肺组织中cNOS的表达，对CB产生治疗作用。