复合添加剂对大鼠抗运输应激能力的影响及配伍剂量筛选

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本研究旨在探讨抗应激复合添加剂在抵抗大鼠模拟运输应激中的作用,为新型抗应激复合饲料添加剂的开发提供参考。本试验以12周龄清洁级雄性Wistar大鼠(体重250±20g)作为试验对象,根据L9(34)正交试验设计将大鼠随机分为阴性对照组(空白对照)、阳性对照组(应激对照组)和9组添加剂试验组,每组10只,饲养环境温度(22±1)℃,相对湿度50%60%,自由采食和饮水。预饲一周后对大鼠进行添加剂灌胃,试验组用抗应激复合添加剂(维生素C+维生素E+碳酸氢钾+γ-氨基丁酸,用0.5%羧甲基纤维素钠作助悬剂)进行灌胃,两个对照组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液。灌胃一周后利用摇床模拟运输应激,摇床转速160r/min,持续时间2h。运输应激后立即采血并分离血清和淋巴细胞。采用终点法检测大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、血糖(GLU)的含量变化;采用Elisa方法检测促肾上腺皮质激素(ACTH)、糖皮质激素(GC)以及部分细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α)含量的变化;采用q-PCR及Western Blotting方法检测淋巴细胞HSP70表达水平的变化。并利用主成分分析(PCA)和综合平衡法对各指标数据进行分析筛选,确定4种添加剂的最佳灌胃剂量。试验结果如下:(1)抗应激复合添加剂对模拟运输应激大鼠血糖、酶和相关激素的影响经2h运输应激后大鼠GLU普遍呈升高趋势,阴性对照组与阳性对照组相比无显著性变化(P>0.05),第7组与阳性对照组相比差异明显(P<0.05),其他各组与阳性对照组相比并无统计学显著性差异(P>0.05);阳性对照组大鼠CK浓度与第1、3、4、6、7组和阴性对照组相比均呈极显著性升高(P<0.01),与第9组相比呈显著性升高(P<0.05);LDH浓度检测结果显示,与阳性对照组相比,阴性对照组和第1组差异极显著(P<0.01),第4组差异显著(P<0.05);阳性对照组与第4组和阴性对照组相比ACTH浓度升高极显著(P<0.01),与第2、3、5、6、7和9组相比ACTH浓度升高显著(P<0.05);各组GC浓度与阳性对照组相比,第4组和阴性对照组差异显著(P<0.05),其他各组与阳性对照组相比并无显著性差异(P>0.05)。(2)抗应激复合添加剂对模拟运输应激大鼠细胞因子的影响运输应激后,第1、2、4、5、6组和阴性对照组的IL-2浓度均显著低于阳性对照组(P<0.05);阳性对照组IL-4的浓度极显著高于阴性对照组和第4组(P<0.01),显著高于第3组和第5组(P<0.05),其他各组无显著性差异(P>0.05);阳性对照组IL-6的浓度显著高于第2组(P<0.05),其他各组与阳性对照组相比并无显著性变化(P>0.05);TNF-α的浓度变化显示,其中阳性对照组与阴性对照组和第3组相比呈显著性升高(P<0.05),与其他各组相比无显著性差异(P>0.05)。(3)抗应激复合添加剂对模拟运输应激大鼠淋巴细胞HSP70表达的影响HSP70mRNA水平q-PCR检测结果显示,阳性对照组与第7组相比差异不显著(P>0.05),与其他各组相比均呈极显著升高(P<0.01);Western Blot检测结果显示,阳性对照组与阴性对照组相比升高极显著(P<0.01),与第2组和第4组相比升高极显著(P<0.01),与第1、5和8组相比升高水平显著(P<0.05)。(4)抗应激复合添加剂最优配伍剂量的筛选采用主成分分析(PCA)与综合平衡法相结合,利用SPSS19.0,经过对11项指标原始数据进行PCA分析与综合平衡法验证,最终确定大鼠每千克体重最佳灌胃剂量为VC10mg/kg,VE5mg/kg,GABA3mg/kg,KHCO315mg/kg。结论如下:抗应激复合添加剂对降低大鼠运输应激敏感性,抵抗运输应激具有较好的效果。四种添加剂饲料添加的最佳剂量为VC200mg/kg,VE100mg/kg,GABA60mg/kg,KHCO3300mg/kg。
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