别隐品碱和原阿片碱在蛋鸡体内代谢及在鸡蛋中残留消除规律研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wudingyong2009
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近年来,抗生素在养殖业中的滥用使得细菌耐药性增强、动物源性食品中残留超标,严重危及食品和公共卫生安全。为了规范抗生素在养殖业的使用,我国正全面实施饲料禁抗、兽药减抗的政策,鼓励对天然中药类添加剂和兽药的研发与应用。博普总碱散?为农业部获批的二类新中兽药,活性成分为别隐品碱(ALL)和原阿片碱(PRO),因对蛋鸡输卵管炎和大肠杆菌病引起的腹泻有良好治疗效果而备受关注。目前,国家尚未对新中兽药在靶动物体内的残留代谢试验作规定,因此,本实验以靶动物蛋鸡为实验对象,研究ALL和PRO在蛋鸡体内代谢和鸡蛋的残留及消除规律,旨在为博普总碱散?在残留代谢方面的安全性评价做出前瞻性研究,为其临床应用及推广提供数据支撑和理论依据。本研究的主要内容有:(1)首次建立了博普总碱散?中活性成分ALL和PRO在鸡蛋中的液质联用(UPLC-MS)定量分析方法。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,17 min内完成对两种生物碱的分析。前处理选用常规固液共萃取,乙腈作为提取溶剂,正己烷为去脂材料。方法学考察结果显示,ALL、PRO分别在0.25~500μg/kg、1.25~500μg/kg的浓度范围呈现良好的线性(R~2≥0.999),定量限分别为0.25μg/kg、1.25μg/kg。所有分析物的回收率为93.17~103.68%,基质效应为88.10~95.55%,专属性、不同环境下的稳定性、批内(间)准确度和精密度等考察指标均在合规范围之内。(2)将建立的UPLC-MS定量方法应用于博普总碱散?在鸡蛋中的残留及消除规律的分析。以临床剂量400 mg/kg、临床5倍高剂量2000 mg/kg的博普总碱散?混饲于罗曼灰蛋鸡日粮中,分别监测给药期(7天)和停药期(14天)ALL、PRO在鸡蛋中的残留量。临床剂量组结果显示,给药期及停药期内ALL均未检出,PRO在给药第7天残留量达到最大,残留浓度为2.8±0.61μg/kg,在停药第3天低于检出限;高剂量组结果显示,ALL在停药第1天残留量达到峰值,为8.61±1.78μg/kg,停药第14天仍有微量残留,浓度为1.34±0.35μg/kg,PRO在停药第1天残留量最高,残留浓度为16.72±3.07μg/kg,停药第7天低于检出限。根据对数据的分析发现,博普总碱散?中ALL和PRO在鸡蛋中具有沉积速度慢、消除速率较快的特点。(3)首次采用静脉注射的给药方式,研究ALL和PRO单体在蛋鸡体内的代谢产物及代谢途径。以1 mg/kg剂量对罗曼灰蛋鸡静脉注射给药ALL和PRO单体,对不同时间段的血浆、粪便进行收集、处理,采用广泛靶向筛查的方法对可能的代谢产物进行二级质谱分析,根据二级碎片离子解析质谱裂解规律从而推断代谢产物的结构,推断出ALL的代谢产物9种、PRO的代谢产物12种,分别命名为ALL-M1~M9、PRO-M1~M12,其中,2种PRO的代谢产物的结构式为首次推断。通过对代谢产物的代谢途径分析,在蛋鸡体内生物转化主要存在以下形式:甲基化、去甲基、氧化、葡萄糖醛酸化等。
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