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第一部分IBS-D患者临床症状、病理生理学异常与粪便胆汁酸的相关性探究背景:胆汁酸（Bile acids,BAs）是一类重要的代谢产物,对肠道动力、分泌等功能有重要的调节作用,亦可能诱导内脏敏感性增高,近年来在腹泻型肠易激综合征（irritable bowel syndrome withpredominantdiarrhea,IBS-D）相关的研究中逐渐引起了关注。但目前我国内地尚缺乏IBS-D患者肠道胆汁酸代谢情况的相关研究。初级胆汁酸在肝脏合成后进入肠道转化为次级胆汁酸。成纤维细胞生长因子19（Fibroblast growth factor 19,FGF19）由回肠上皮细胞合成,对初级胆汁酸的合成有负反馈调节作用。目的:分析IBS-D患者和健康对照的粪便胆汁酸组成,探究IBS-D患者临床表现及病理生理学改变与粪便胆汁酸之间的相关性,并通过空腹血清FGF19间接评估胆汁酸合成情况。方法:通过标准化问卷评估患者症状严重程度、精神心理状态、生活质量;通过直肠球囊扩张试验评估受试者内脏敏感性;通过24h胃肠传输试验评价患者肠道动力;应用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）定性、定量测定粪便胆汁酸;ELISA法检测血清FGF19。结果:69例基于罗马Ⅳ标准诊断的IBS-D患者和34例健康对照纳入了本研究。IBS-D患者直肠球囊扩张试验最大耐受阈值显著降低、排便感觉阈值有降低趋势。IBS-D患者24h胃肠传输试验的直乙以上钡条残留率显著降低、24h钡条排出率显著升高。55例IBS-D患者和28例健康对照完成了粪便胆汁酸测定,IBS-D患者粪便胆酸（cholic acid,CA）、鹅脱氧胆酸（chenodeoxycholic acid,CDCA）及相应结合型胆汁酸均显著升高,石胆酸（lithocholic acid,LCA）显著降低,脱氧胆酸（deoxycholic acid,DCA）有降低趋势,胆汁酸总量显著升高。在IBS-D患者中,排便频率与粪便中CA、CDCA水平呈显著正相关,与DCA、LCA水平呈显著负相关;直乙以上钡条残留率与CA、CDCA显著负相关;内脏敏感性检测的初始感觉阈值与CDCA水平呈显著负相关,排便感觉阈值与CDCA有负相关趋势。IBS-D患者和健康对照空腹血清FGF19水平无显著差异,但患者组血清FGF19与粪便总胆汁酸显著负相关。结论:IBS-D患者的粪便胆汁酸中,总胆汁酸、初级胆汁酸显著升高,次级胆汁酸显著降低。总胆汁酸升高可能与FGF19减低、胆汁酸合成的负反馈调节减弱有关。胆汁酸可能通过影响肠道动力和内脏敏感性参与IBS-D的发病。第二部分IBS-D患者粪便胆汁酸组分与粪便菌群的相关性探究背景:胆汁酸在肠道的代谢过程依赖肠道菌群,可以将结合型胆汁酸解离为游离型胆汁酸的菌群种类丰富,但仅有少数菌群可以将初级胆汁酸代谢为次级胆汁酸,其中绝大多数属于Ruminococcaceae科。目的:探究IBS-D患者粪便菌群是否与健康对照存在显著差异;如果是,粪便胆汁酸组分含量异常是否与粪便菌群异常有关。方法:应用16S rRNA基因测序检测受试者粪便菌群;应用UPLC-MS/MS测定受试者粪便胆汁酸;采用饮食频率问卷评估受试者最近一年的饮食习惯。结果:本研究共纳入了 55例IBS-D患者和28例健康对照。IBS-D患者粪便菌群与健康对照相比Clostridia纲、Clostridiales目及Ruminococcaceae科显著减少。所有受试者中,粪便CA、CDCA浓度与Ruminococcaceae科相对丰度呈显著负相关,LCA浓度与Ruminococcaceae科相对丰度呈显著正相关,DCA浓度与Ruminococcaceae科相对丰度有正相关趋势。IBS-D患者进食薯类、蔬菜、水果、豆类及其制品的频率显著低于健康对照,进食加工肉、油腻食物、烧烤食物的频率显著高于健康对照。结论:IBS-D患者的肠道胆汁酸代谢失衡可能与Ruminococcaceae科菌群的减少有关。饮食因素可能参与了 IBS-D患者菌群失调的形成。第三部分IBS-D患者及健康对照结肠黏膜胆汁酸受体表达情况比较背景:胆汁酸受体介导了胆汁酸对肠道功能的调节,胆汁酸受体中TGR5（TakedaG protein-coupled receptor 5）和维生素 D 受体（Vitamin D receptor,VDR）在结肠有丰富表达。不同的胆汁酸在激活胆汁酸受体方面具有不同程度的效力,对TGR5的激活能力排序为LCA>DCA>CDCA>CA;LCA是天然胆汁酸中对VDR最有效的激动剂,CA、CDCA和DCA不能激活VDR。目的:比较IBS-D患者和健康对照结肠黏膜中TGR5和VDR蛋白表达水平,并探究其和患者临床表现、粪便胆汁酸之间的相关性。方法:通过标准化问卷评估患者症状严重程度、精神心理状态、生活质量;应用UPLC-MS/MS测定受试者粪便胆汁酸;应用免疫组化法检测直肠乙状结肠交界处黏膜TGR5和VDR的表达。结果:本研究共纳入了 52例IBS-D患者和32例健康对照。结肠黏膜中TGR5和VDR表达主要分布于上皮和腺体。IBS-D患者结肠黏膜TGR5免疫组化染色强度显著高于对照组,VDR染色强度在两组间无显著差异。中重度腹痛患者结肠黏膜TGR5表达水平显著高于轻度腹痛患者,腹痛频率≥4天/周的患者结肠黏膜TGR5表达水平较腹痛频率<4天/周的患者有升高趋势。38例IBS-D患者、20例健康对照同时提供了粪便和结肠黏膜样本,所有受试者中,结肠黏膜TGR5表达水平与粪便CA、CDCA显著正相关,与粪便DCA、LCA显著负相关。结论:胆汁酸受体TGR5在IBS-D患者结肠黏膜的表达水平显著高于健康对照,且可能在IBS-D患者腹痛的形成中发挥了作用。IBS-D患者中肠道胆汁酸的代谢异常可能影响了结肠黏膜TGR5的表达。