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目的:糖尿病大血管病变是2型糖尿病（Type 2 diabetesmellitus,T2DM）患者致死、致残的首要原因,而下肢血管病变又是最常见的大血管病变之一,临床尚无特异性血清生化指标用于早期诊断,因此,寻找T2DM合并下肢血管病变的血清生物标志物显得极为重要。本研究利用蛋白质组学相对定量技术,检测T2DM合并/不合并临床下肢血管病变患者血清蛋白质谱的差异表达,利用酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法对筛选出的差异蛋白质进一步验证,从而寻找T2DM合并下肢血管病变的血清生物标志物,为临床诊断及治疗提供帮助。方法:1.选择2014年1月～2014年12月在大连医科大学附属第一医院就诊T2DM患者及健康体检人群,根据其有无T2DM及是否合并下肢血管病变,分别纳入无糖尿病无大血管病变组（Non-diabetes&non-macrovascular group,NDNM）、T2DM不合并大血管病变组（Diabetes&non-macrovascular group,DNM）、T2DM 合并亚临床大血管病变组（Diabetes&subclinical macrovascular group,DSM）及 T2DM合并临床下肢血管病变组（Diabetes&peripheral arterial disease group,DPA）,共计4组,每组30例研究对象。收集研究对象血清,记录一般临床资料,进行统计学分析。2.应用同位素相对标记与绝对定量（isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,iTRAQ）肽段标记联合高效液相色谱-质谱技术对血清进行蛋白质鉴定,应用Uniprot数据库筛选组间差异蛋白质。使用京都基因与基因组百科全书数据库对筛选出的差异蛋白质进行通路富集分析,以此筛选并分析这些差异蛋白质参与的最主要的代谢/信号转导通路。3.从上述通路挑选5个差异蛋白质应用ELISA技术进行定量检测,其中4个差异蛋白质为候选早期诊断指标,即T2DM合并亚临床大血管病变筛查指标,分别为胰岛素样生长因子1（Insulin-like growth factor 1,IGF-1）、烯醇化酶1（Alpha-enolase,ENO1）、α2-巨球蛋白（Alpha 2 macroglobulin,A2M）及补体 7（Complement 7,C7）;2个差异蛋白质为候选诊断指标,即T2DM合并临床下肢血管病变指标,分别为IGF-1及胰岛素样生长因子结合蛋白3（Insulin-like growth binding protein 3,IGFBP-3）。结果:1.T2DM发生亚临床大血管病变的危险因素为年龄,OR值为1.111。T2DM发生临床下肢血管病变的危险因素为年龄、T2DM病程及性别,OR值分别为1.225、1.575 及 0.014。2.蛋白质组学结果显示,四组血清样品鉴定到888个蛋白质。DSM与DNM筛选出34个差异蛋白质（18个上调,16个下调）,其中9个蛋白质主要参与4条代谢/信号转导通路（IGF-1受体介导的信号转导通路、补体及凝血级联反应通路、碳水化合物代谢通路及氨基酸合成通路）。DPA与DNM筛选出52个差异蛋白质（34个上调,18个下调）,其中3个蛋白质主要参与1条代谢/信号转导通路（IGF-1受体介导的信号转导通路）。3.ELISA结果显示,DSM比DNM,血清IGF-1水平明显下降（61.80±16.53ng/ml vs.73.90±26.6ng/ml,P=0.044）差异显著、血清ENO1水平明显下降（147.07±69.48 U/ml vs.201.59±95.76 U/ml,P=0.017）差异显著、血清A2M水平明显升高（1281.51 ±344.39μg/mlvs.1097.57±231.70μg/ml,P=0.019）差异显著及血清C7水平明显升高（80.98±13.11μg/ml vs.74.75±10.80μg/ml,P=0.056）差异不显著,IGF-1、ENO1及A2M组间差异显著,均有统计学意义,其趋势与iTRAQ结果一致;C7组间虽无显著差异,但趋势与iTRAQ结果一致。DPA比DNM,血清IGF-1水平明显下降（58.12±28.11ng/ml vs.73.90±26.65ng/ml,P=0.032）差异显著,血清IGFBP-3水平明显下降（1937.53±621.94ng/ml vs.2499.72±746.61ng/ml,P=0.020）差异显著,IGF-1 及IGFBP-3组间差异显著,均有统计学意义,且趋势与iTRAQ结果一致。4.受试者工作特征曲线结果表明,ENO1用于诊断T2DM合并亚临床大血管病变有显著意义,IGF-1及IGFBP-3用于诊断T2DM合并临床下肢血管病变有显著意义,且IGFBP-3诊断效能优于IGF-1。结论:1.年龄、T2DM病程及男性是T2DM合并临床下肢血管病变的危险因素。2.T2DM合并亚临床大血管病变有34个差异蛋白质,其中9个蛋白质主要参与IGF-1受体介导的信号转导通路、补体及凝血级联反应通路、碳水化合物代谢通路及氨基酸合成通路这4条代谢/信号转导通路;T2DM合并临床下肢血管病变有52个差异蛋白质,其中3个蛋白质主要参与IGF-1受体介导的信号转导通路这1条代谢/信号转导通路。3.ENO1可能为T2DM合并亚临床大血管病变的诊断指标,IGF-1及IGFBP-3可能为T2DM合并临床下肢血管病变的诊断指标。