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研究背景和目的：肝纤维化(Hepatic fibrosis, HF)是肝脏对各种慢性损伤的炎症修复过程,主要表现为肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)的活化和增殖及细胞外基质(Extracellular matrixc, ECM)的过度增生与异常沉积,肝脏结构和功能的异常改变。有效的控制肝纤维化的发展对于肝硬化和肝癌至关重要。诸多肝损伤因素在其致病过程中均不同程度地伴有氧化应激(Oxidative stress, OS).产生大量活性氧(Reactive oxygen species, ROS)。ROS在激活肝星状细胞,介导其分化、增殖和胶原合成的过程中扮演着重要的角色。近年来研究发现肝纤维化的发生与肝组织局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosteronesystem, RAAS)的激活密切相关,认为ACE-AngⅡ-AT1R轴能够促进肝纤维化的发生发展。与之相对的ACE2-Ang(1-7)-Mas轴可拮抗AngⅡ的生物学效应,具有抗肝纤维化的作用。然而RAAS影响肝纤维化的具体机制尚不明确,因此探究ACE-Ang Ⅱ-AT1R/ACE2-Ang(1-7)-Mas轴在肝纤维化中扮演的角色,可能为肝纤维化的防治提供新的思路。PPAR-γ、NF-κB、Nrf2通路在肝纤维化过程中炎症反应、肝细胞的凋亡、HSC的激活和增殖以及氧化和抗氧化平衡中发挥着重要作用,且彼此存在相互作用。因此推测ROS-RAAS通路在肝纤维化中信号转导过程可能与PPAR-γ、NF-κB、Nrf2通路有关。本课题通过电子自旋共振技术(Electron spin resonance, ESR)探索肝纤维化中氧化应激产生自由基的类型,探讨肝纤维化形成过程中ACE-AngⅡ-AT1R轴和ACE2-Ang(1-7)-Mas轴所起的作用,并观察鳖甲煎口服液(Biejiajian oral liquid, BOL)对氧化应激、RASS各成分,以及ROS-RAAS相关通路的影响,为肝纤维化的临床早期干预提供新的思路。方法：建立猪血清诱导的大鼠肝纤维化模型,采用ESR检测肝匀浆中的自由基。Wistar大鼠随机分为治疗组与预防组,每组再分为6小组,分别为正常组、模型组、维生素E(Vitamin E, VE)组、依那普(Enalapril, Ena)组、BOL高、低剂量组。HE染色观察大鼠肝脏病理改变。酶联免疫法检测不同时段大鼠肝脏匀浆中AngⅡ,Ang(1-7)水平。荧光定量PCR检测大鼠肝脏GEN、AGT、ACE、AT1R和CYP11B2mRNA的表达。免疫组化法观察ACE、ACE2、ATiR、Mas蛋白在肝组织中的表达水平。Western Blot检测PPAR-γ、NF-κB、Nrf2通路蛋白的表达。结果：(1)经猪血清刺激后,大鼠肝小叶被破坏,有炎性浸润,胶原大量形成,形成纤维结节。BOL能通过保护肝细胞,减少胶原合成与促进降解从而发挥抗肝纤维化的作用。(2)猪血清诱导的大鼠肝纤维化过程伴有氧化应激,产生烷基自由基。BOL能有效清除自由基。(3)在大鼠肝纤维化进展过程中,肝脏局部RAAS被激活,AngⅡ、Ang(1-7)水平逐渐升高；肝脏ACE、ACE2、AT1R、Mas表达增高,分布广泛。BOL治疗组与预防组均能显著降低纤维化大鼠肝脏匀浆中AngⅡ水平,同时提高Ang(1-7)水平。与模型组相比发现经BOL干预后ACE、AT1R表达降低,而ACE2、Mas表达持续增高。(4)荧光定量PCR结果显示正常大鼠能表达AGT, Renin, ACE, CYP11B2和AT1R的mRNA,随着肝纤维化的进展,肝脏RAAS被激活,上述基因表达逐渐升高,与正常组有显著差异,且BOL能够显著抑制上述基因的表达。(5)猪血清诱导的大鼠肝纤维化过程中BOL对PPAR-γ、NF-kB、Nrf2通路的影响：Western Blot检测显示,与模型组相比,BOL可能通过抑制NF-κB通路,激活PPAR-y和Nrf2通路发挥抗纤维化作用。结论：(1)异种血清诱导大鼠肝纤维化时伴有氧化应激并产生烷基自由基,BOL对其有很好的清除作用。(2)在大鼠肝纤维化进展过程中,肝脏局部RAAS被激活,各成分表达增高,ACE-AngⅡ-AT1R轴促进肝纤维化的发展,ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴对肝纤维化起保护作用。BOL能够通过影响大鼠RAAS,来发挥抗肝纤维化的作用。(3)调节PPAR-γ、NF-κB、Nrf2通路可能是BOL产生抗纤维化作用的机制之一。