HLH与脓毒症患儿CD14~+细胞Toll样受体及其信号通路表达差异的研究

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目的:比较噬血细胞综合征(HLH)及脓毒症患儿外周血单核细胞上Toll样受体(TLR)及其信号通路蛋白表达水平的差异,探讨Toll样受体及其信号通路在HLH及脓毒症发生过程中的作用机制,以期为两组疾病的早期鉴别诊断及治疗提供理论依据。方法:收集初发HLH、脓毒症患儿及健康对照组儿童外周血各18例,运用流式细胞术检测外周血CD14~+细胞TLR2、3、4、7、9蛋白的表达水平;RT-PCR方法检测CD14~+细胞TLRs配体MyD88、TRIF和相关信号分子IRAK4、TRAF6、TRAM、TBK1、IRF3等分子mRNA的表达水平;ELISA方法检测血浆中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、IFN-α、TNF-α等细胞因子的水平。运用SPSS 22.0软件对HLH组、脓毒症组及健康对照相关组结果进行统计分析。结果:1.HLH组及脓毒症组CD14~+细胞TLR2、3、4表达均明显高于健康对照组(P均<0.01),尤以TLR2增高最为显著,但HLH与脓毒症两组间TLR2、3、4表达无明显差异(P>0.05);HLH组TLR7表达较脓毒症组及健康对照组均有显著增高,具有统计学意义(P均<0.05),而脓毒症组较对照组无明显增加(P均>0.05);HLH组及脓毒症组TLR9表达较健康对照组均稍降低,但无统计学意义(P均>0.05)。2.MyD88途径信号分子表达:MyD88、IRAK4、TRAF6表达在HLH组表达较对照组均显著升高(P均<0.05),有统计学意义;脓毒症组MyD88表达较HLH组及健康对照组有明显升高(P均<0.05),而TRAF6表达却较另两组显著减低,具有统计学意义(P均<0.05)。TRIF途径信号分子表达:HLH组TRAM表达较对照组明显减低,且有统计学意义(P<0.05),TRIF、TBK1、IRF3表达较健康组略有升高,但无统计学意义(P均>0.05);脓毒症组TRIF、TBK1、IRF3表达明显低于HLH组及对照组,具有统计学意义(P均<0.05)。3.HLH组及脓毒症组血浆IL-1β、IL-2、IL-10、IL-12、INF-γ及TNF-α水平均明显高于健康对照组,具有统计学意义(P均<0.05);HLH组IL-10、IL-12、INF-γ水平明显高于脓毒症组,有统计学意义(P均<0.05),而脓毒症组IL-1β、IL-6明显高于HLH组,有统计学意义(P均<0.05);HLH组及脓毒症组TNF-α水平较对照组均明显增高(P均<0.05),但HLH与脓毒症两组间TNF-α水平无统计学意义(P>0.05)。HLH组及脓毒症组IFN-α水平虽有所增加,但与健康对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:1.TLR2、3、4可能参与了HLH及脓毒症两组疾病的固有免疫反应;TLR7可能参与了HLH的发生。2.TLRs及其信号传导通路在HLH及脓毒症这两组疾病中分子表达存在差异,CD14~+细胞在脓毒症高炎症反应中可能未起到主导作用;而HLH组CD14~+细胞TLR4信号传导通路中MyD88途径显著活化,而TRIF途径活化受限,可能是造成HLH患者出现机体免疫失衡的重要原因。3.细胞因子水平检测显示两组疾病IL-6、IL-10、IL-12、INF-γ及IL-1β水平存在一定差异,可能可以为临床鉴别两组疾病提供重要的临床实验参考依据。
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