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研究目的:本研究的目的是探索并验证AZGP1基因与结肠癌发生发展的相关性,并进一步研究其在结肠癌中的生物学功能,探讨其对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响机制,有助于进一步揭示结肠癌发生发展分子生物学机制;作为一种分泌蛋白,进而探索其对结肠癌的临床诊断意义,发掘AZGP1的临床应用潜力。 方法:基于生物信息学,分析癌症基因图谱(TCGA)的数据;使用课题组标本库新鲜冰冻结肠癌样本,运用Real-time PCR和Western Blot在转录和翻译水平进一步验证AZGP1的结肠组织中的表达情况;利用课题组前期建立的组织芯片,以及收集的临床病理资料和随访信息,在大样本结肠癌组织中进一步验证AZGP1的表达情况;通过Kaplan-Meier生存曲线法和Cox比例风险回归模型对AZGP1的表达情况与患者术后的复发和总生存进行分析;通过构建LV-AZGP1-RNAi慢病毒载体的方法,制备AZGP1表达下调的稳定结肠癌细胞株;通过体外实验检测AZGP1对不同结肠癌细胞株的生长、增殖、周期、凋亡等恶性生物学行为的影响;通过裸鼠体内成瘤实验检测AZGP1对结肠癌细胞对体内成瘤能力的影响;使用ELISA的方法检测其在结肠癌患者和健康对照人群血清中的差异;应用了受试者工作特征曲线(ROC)法来,来评估指标的潜在诊断价值;然后运用留一交叉验证法来进一步验证AZGP1的诊断能力。 结果:分析癌症基因图谱(TCGA)的数据,显示AZGP1在结肠癌组织中表达明显上调。我们使用Real-time PCR和Western blot技术检测AZGP1在新鲜冰冻结肠癌样本中的表达情况,显示AZGP1 mRNA和蛋白在结肠癌组织中高表达(P<0.001)。使用免疫组化在190例大样本组织芯片中验证发现AZGP1在结肠癌中组织中的表达明显上调(P<0.001),且AZGP1的表达与肿瘤浸润深度(T)分期(P=0.012),淋巴结转移(N)分期(P=0.005),AJCC结肠癌分期(P=0.024)相关。Kaplan-Meier生存分析评估显示:AZGP1表达上调的患者,5年无病生存率和5年总生存率显著低于AZGP1阴性的患者(P<0.001);多因素Cox比例风险回归模型显示AZGP1强阳性表达的患者相对于阴性的患者,手术后复发和死亡风险显著增加。在体外细胞功能实验中,发现敲减AZGP1能够显著降低结肠癌细胞的生长、增殖能力,增加凋亡率。裸鼠体内成瘤模型显示敲减AZGP1能够显著减弱结肠癌细胞在裸鼠体内成瘤的能力。ELISA的结果显示结肠癌患者血清中AZGP1的浓度有一定的诊断价值, CEA、CA19-9和AZGP1三者联合后诊断价值显著提高。 结论:AZGP1在结肠癌组织中表达显著上调,且与肿瘤浸润深度(T)分期,淋巴结转移(N)分期,AJCC结肠癌分期相关,说明AZGP1是与结肠癌发生发展相关的基因;AZGP1可以作为结肠癌患者独立的预后评估因素;AZGP1能够通过促进结肠癌细胞的生长增殖以及减少凋亡等方式来增强其恶性生物学行为;AZGP1在结肠癌患者血清中有一定的诊断价值。