本研究系统研究了产中性蛋白酶菌株的菌种选育、原生质体复合诱变及产酶条件、酶学性质和菌种保藏以及酶的保藏。 本研究论文主要包括四个方面的内容： （1）产中性蛋白酶细菌的筛选及部分酶学性质的初探 从土壤中分离纯化得到一株产中性蛋白酶菌株B_x-4，经初步鉴定为枯草芽孢杆菌。比较筛选了酪素培养基、淀粉酪素培养基、酵母膏酪素培养基、LB+酪素培养基、脱脂奶粉培养基，发现以脱脂奶粉培养基作为鉴别培养基效果较好。单因素碳、氮源及正交试验发现以2％玉米粉、3％豆粕粉作为碳、氮源并辅以3％麸皮作为生长因子产酶最好。Zn²⁺、K⁺、Na⁺、Ca²⁺、Mg²⁺等对产酶也有不同程度的激活作用，以其中Zn²⁺激活作用最明显。Fe²⁺对产酶有强抑制作用。产酶最佳起始pH为8.0。酶学性质初步研究发现酶最适作用温度为55℃，最适作用pH为7.5，Ca²⁺对酶有一定的激活作用和稳定作用，Fe³⁺对酶有强烈的抑制作用。 （2）Bacillus subtilis B_x-4原生质体复合诱变选育产酶菌株 Bacillus subtilis B_x-4菌体生长滞后期为0-2h，7h后达到了菌种的对数生长末期，对数生长中期为5hr左右。Bacillus subtilis B_x-4对甘氨酸与青霉素非常敏感。甘氨酸最适作用浓度为2mg／mL，青霉素作用单位为1U／mL，溶菌酶作用最适浓度为2mg／mL，时间为60min。在优化条件下进行原生质体形成与再生综合实验，形成率和再生率均分别平均达到77.44％和53.07％。Bacillus subtilis B_x-4原生质体对紫外线作用不太敏感。紫外诱变筛选得到正突变株UV₁₁。UV₁₁经UV+HNO₂诱变选育得到正突变株UN₉。UN₉再经UV+NTG复合诱变得到一株高产、稳定的中性蛋白酶菌株并命名为Bacillus subtilis Promax NTG₁₄，酶活达4286.09U／mL。遗传稳定性研究表明，Bacillus subtilis Promax NTG₁₄具有良好的遗传稳定性，传代5次酶活均保持在4000U／mL以上。 （3）Bacillus subtilis Promax NTG₁₄产酶条件及酶学性质研究 Bacillus subtilis NTG₁₄以玉米粉+甘油为复合碳源，以豆粕粉做为氮源，麸皮提供生长因子时产酶最好。选用L₁₆（4⁵）正交试验表进行正交试验，研究结果表明以2％玉米粉、2％甘油、3％豆粕粉、3％麸皮作为碳、氮源配比时对产酶最为有利。极差分析发现豆粕粉对产酶影响最为显著，甘油和玉米粉次之，麸