肝脏特异性IgD高表达转基因小鼠的构建

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yulu0355
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
IgD是一种进化上古老的免疫球蛋白重链基因类型,普遍存在于除鸟类之外的有颌类脊椎动物中。IgD分子结构有丰富的多样性,其重链恒定区结构域的数量随物种不同有^艮大变化,总的趋势是随着进化逐渐减少。和其它免疫球蛋白一样,I g D具有跨膜型(mIgD)和分泌型(sIgD)两种类型。研究表明I g D的结构、外显子排列、生理定位及在免疫反应中的功能都有别于其它免疫球蛋白。但由于血清中IgD含量^艮低,不能采用收集血清蛋白来检测受体的手段对血清IgD进行研究,限制了对IgD功能的深入研究。  高IgD综合征(HyperimmunoglobulinemiaD syndrome,H I D S),是以血清中 IgD浓度升高、白细胞增多、血沉增快等为生化特征和以周期性高热、腹痛、腹泻、关节炎、淋巴结胂大等为生理特征的一种综合症。有研究表明甲表戌酸激酶(mevalonate kinase,M V K)基因突变可能是HIDS发作的原因,但具体机制尚不清楚。还有研究表明HIDS的发作可能是由于血清中IgD的升高引起的,但IgD的具体功能还不清楚。由于sIgD在血清中的含量极低且半衰期短,很难开展相关研究,所以我们构建了肝脏特异性高表达sIgD的转基因小鼠模型。转基因小鼠模型可用于开展IgD结构及功能的研究,深入了解HIDS的发病机理以及IgD在此过程中的作用,推进相关药物的研发与推广,进而提出针对性强而有效的治疗方案。  本实验通过5RACE技术和免疫球蛋白可变区基因的特异性扩增方法,扩增了小鼠sIgD重链与轻链可变区基因。通过3RACE扩增得到sIgD重链与轻链的恒定区基因。利用融合PCR方法得到sIgD全长序列。并以肝脏合成的白蛋白(ALB)基因启动子,以肝脏中的甲胎蛋白(A F P)基因增强子,构建了sIgD真核表达载体。利用脂质体法将载体导入细胞(HepA1-6细胞系)中,在细胞水平对载体的表达进行了初步的检测。通过显微共注射技术将酶切线性化的重组质粒注入小鼠受精卵内,并利用PCR、Southern Blotting、R T-P C R、Q-P C R、Western Blotting等技术对F q代小鼠进行检测。F q代共有6只阳性小鼠。F1代小鼠共127只,断尾提取基因组,RT-PCR检测,其中检测为sIgDH阳性的为54只,检测为I g L阳性的为55只,双阳性的为54只。在转基因小鼠肝脏和脾脏中检测到了sIgD的重链和轻链的少量表达。转基因小鼠肺和肾脏中也检测到了sIgD重链和轻链的表达。
其他文献
提出了一种新的矿产资源靶区定位预测的统计方法—秩特征分析方法。该方法以地质变量之间秩相关分析为基础,根据地质变量集合中某一地质变量与其余地质变量之间总的秩相关程度
创新创业教育是一种全新的教育理念,也是对师范教育功能的重新定位,反映了新时期创新教育思想的价值取向.创新创业教育基地建设是建设“新师范”、培养高质量师范生的重要举
载脂蛋白AV基因(apolipoproteinAV,apoAV)是一个通过生物信息学比对而发现的新基因,在人、鼠中与血浆甘油三酯(TG)浓度有极大相关。本研究利用候选基因法,根据GenBank上预测的鸡
优良作风是党的先进性要求的应有之义。改进作风是贯彻落实科学发展观的必然要求。各级领导干部身为部队建设的中坚力量,言行举止、作风形象对部队有着示范导向作用。要推动
实施“大学生科研训练计划”已成为国内外众多高校培养新型人才、增强学生综合素质的有效措施.河北工业大学海洋技术专业开展基于海洋化学、海洋生物和海洋环境三方面交叉的
古树名木是林木资源中的瑰宝,近年来,青壮年古树死顶、新稍短、失绿、多年生叶大量脱落、多果等植株衰老现象日趋严重,加强古树的保护与复壮工作迫在眉睫。为了探讨草坪草对古树
创新能力是材料类大学生应具备的重要能力.培养材料类大学生的创新能力,不仅是对材料类大学生自身的要求,更是对国家重要发展战略的响应.针对当下材料专业教学体系中课程设置
围绕企业文化体系建设现状,提出了成功的企业文化体系应具备四方面特质:以先进的文化引领人;以高尚的文化感动人;以精彩的文化吸引人;以温暖的文化留住人。指出文化体系建设中存在
四川白皎无烟煤对碘和溴的吸附特征徐龙君刘成伦鲜学福张代钧(重庆大学资源及环境工程学院重庆400044)关键词煤,吸附,碘,溴,动力学方程碘是煤液化的有效催化剂,煤也能吸附一定量的碘,因而
本研究采用3个试验对紫花苜蓿寡肽的制备工艺及其利用性进行了系统的研究。主要结果如下: 1.采用酸化加热加盐的综合方法从苜蓿干草中提取叶蛋白,以叶蛋白粗蛋白质提取率为指