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IgD是一种进化上古老的免疫球蛋白重链基因类型,普遍存在于除鸟类之外的有颌类脊椎动物中。IgD分子结构有丰富的多样性,其重链恒定区结构域的数量随物种不同有^艮大变化,总的趋势是随着进化逐渐减少。和其它免疫球蛋白一样,I g D具有跨膜型(mIgD)和分泌型(sIgD)两种类型。研究表明I g D的结构、外显子排列、生理定位及在免疫反应中的功能都有别于其它免疫球蛋白。但由于血清中IgD含量^艮低,不能采用收集血清蛋白来检测受体的手段对血清IgD进行研究,限制了对IgD功能的深入研究。 高IgD综合征(HyperimmunoglobulinemiaD syndrome,H I D S),是以血清中 IgD浓度升高、白细胞增多、血沉增快等为生化特征和以周期性高热、腹痛、腹泻、关节炎、淋巴结胂大等为生理特征的一种综合症。有研究表明甲表戌酸激酶(mevalonate kinase,M V K)基因突变可能是HIDS发作的原因,但具体机制尚不清楚。还有研究表明HIDS的发作可能是由于血清中IgD的升高引起的,但IgD的具体功能还不清楚。由于sIgD在血清中的含量极低且半衰期短,很难开展相关研究,所以我们构建了肝脏特异性高表达sIgD的转基因小鼠模型。转基因小鼠模型可用于开展IgD结构及功能的研究,深入了解HIDS的发病机理以及IgD在此过程中的作用,推进相关药物的研发与推广,进而提出针对性强而有效的治疗方案。 本实验通过5RACE技术和免疫球蛋白可变区基因的特异性扩增方法,扩增了小鼠sIgD重链与轻链可变区基因。通过3RACE扩增得到sIgD重链与轻链的恒定区基因。利用融合PCR方法得到sIgD全长序列。并以肝脏合成的白蛋白(ALB)基因启动子,以肝脏中的甲胎蛋白(A F P)基因增强子,构建了sIgD真核表达载体。利用脂质体法将载体导入细胞(HepA1-6细胞系)中,在细胞水平对载体的表达进行了初步的检测。通过显微共注射技术将酶切线性化的重组质粒注入小鼠受精卵内,并利用PCR、Southern Blotting、R T-P C R、Q-P C R、Western Blotting等技术对F q代小鼠进行检测。F q代共有6只阳性小鼠。F1代小鼠共127只,断尾提取基因组,RT-PCR检测,其中检测为sIgDH阳性的为54只,检测为I g L阳性的为55只,双阳性的为54只。在转基因小鼠肝脏和脾脏中检测到了sIgD的重链和轻链的少量表达。转基因小鼠肺和肾脏中也检测到了sIgD重链和轻链的表达。