类黄酮化合物是植物次生代谢的主要多酚类化合物,类黄酮化合物B环的羟基化水平是由P450蛋白家族的类黄酮3’-羟基化酶（F3’H）和类黄酮3’,5’-羟基化酶（F3’5’H）决定。本文以舒茶早为实验材料,从cDNA文库中克隆了 1条CsF3’H和2条CsF3’5’Hs（CsF3’5’Ha和CsF3’5’Hb）基因。通过生物信息学分析,组织特异性表达分析,酵母异源表达分析和点突变酶活性比较等方法,对CsF3’H,CsF3’5’Ha和CsF3’5’Hb三条基因的功能展开研究。本研究对于茶树类黄酮代谢途径中所涉及的结构基因F3’H和F3’5’H功能差异展开的研究,有助于深入了解茶树次级代谢物的合成及衍生化的调控机制。主要研究内容如下:1.利用End to End技术克隆了 1条CsF3’H和2条CsF3’5’Hs基因。通过EXPASy网站预测CsF3’H、CsF3’5’Ha和CsF3’5’Hb的分子量分别为:57.1 kDa、57.0 kDa和57.0 kDa;等电点分别为:6.82、8.83和6.98;基因长度分别为:1557 bp、1533 bp和 1521 bp。2.利用DNAMAN软件比对分析了来自不同植物的F3’Hs和F3’5’Hs。结果表明CsF3’H、CsF3’5’Ha和CsF3’5’Hb均具有四个细胞色素P450的特征保守基序;并通过构建系统发育树分析,结果表明,F3’H和F3’5’Hs分别属于CYP75B和CYP75A亚家族。3.利用PLANTCARE和SOGO网站分析了 CsF3’H和CsF3’5’Hs基因启动子的原件。将CsF3’H和CsF3’5’Hs启动子最终连接到PZZ044（含有GUS基因）载体上,利用农杆菌转染拟南芥技术获得了CsF3’5’Ha和CsF3’5’Hb启动子的转基因植株,GUS染色结果显示’CsF3’5’Hs基因启动子均具有组织表达特异性,CsF3’5’Ha启动子在叶片和茎中表达,在根中不表达;CsF3’5’Hb启动子在叶片边缘和保卫细胞表达,但在茎中不表达。4.利用qRT-PCR技术分析了CsF3’H和CsF3’5’Hs在茶树不同组织的表达特异性和诱导表达特异性。结果表明,CsF3’5’Ha和CsF3’5’Hb在芽和一叶中的表达量均高于其他组织,而CsF3’H在四叶和成熟叶中表达量最高。基因的表达量与物质积累的相关性分析表明,CsF3’5’Hs的表达量与B环-三羟基儿茶素含量的积累呈正相关,CsF3’H基因表达与Q（quercetin）含量积累呈正相关。5.利用酵母异源表达系统研究了 CsF3’H和CsF3’5Hs酶具有催化底物的多样性。结果表明,CsF3’H和CsF3’5’Ha酶具有催化黄烷酮、黄酮醇和二氢黄酮醇的活性,由不同底物催化活性差异推测,最适宜的底物可能为柚皮素（N）。CsF3’5’Hb酶仅具有黄酮醇（包括K和Q）和二氢黄酮醇（包括DHK和DHQ）的催化活性,推测其最适底物可能为DHK。6.利用基因定点突变技术初步探究了 CsF3’H和CsF3’5’Ha决定功能的关键氨基酸位点,发现了 C端两个关键氨基酸位点显著影响CsF3’5’Ha酶的羟基化位点活性。