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【目的】模拟原发性肝细胞癌免疫微环境,探讨调节性T细胞(Treg)对肝癌细胞HepG2周期的影响及其可能机制。【方法】用免疫磁珠分选法从原发性肝细胞癌患者外周血中分离出调节性T细胞,将调节性T细胞与HepG2细胞按照不同的比例分别共培养48h;MTT法检测HepG2细胞的增殖情况,流式细胞仪检测HepG2细胞周期变化情况及两种细胞表面RANK-RANKL受体配体的表达情况,Real-Time PCR法检测细胞周期相关蛋白、周期蛋白依赖性激酶、周期蛋白-周期蛋白依赖性激酶抑制因子基因表达的变化,Western Blot检测HepG2细胞周期相关蛋白、周期蛋白依赖性激酶、周期蛋白-周期蛋白依赖性激酶抑制因子的变化情况;蛋白芯片法检测共培养体系上清液中所分泌TGF-β、IL-10、IL-17等细胞因子的表达水平。【结果】1.调节性T细胞对HepG2细胞增殖的影响:应用CD4+CD25+CD127dim/-Regulatory T Cell Isolation Kit Ⅱ分选原发性肝细胞癌患者外周血调节性T细胞经流式细胞术检测纯度达(93.83±1.97)%;与调节性T细胞共培养后, HepG2细胞增殖水平提高,用流式细胞术检测HepG2细胞周期发生改变,实验组G1期比例降低,S期、 G2期比例升高。2.调节性T细胞对HepG2细胞周期影响机制的探讨:PCR检测表明,HepG2细胞cyclinB、CDK1基因表达倍率增加,P21基因表达倍率降低,Western Blot实验证实cyclinA、cyclinB含量增高,CDK1、CDK2含量升高,P21含量降低;进一步流式细胞术检测发现,RANK在HepG2细胞表面的表达率为(96.88±2.76)%,RANKL在调节性T细胞表面的表达率为(94.61±1.56)%;用蛋白芯片检测发现Treg细胞与HepG2细胞共培养体系中的IL-6、IL6R、sgp130、IL-17、TGFβ、与对照组HepG2培养上清相比含量明显增多。【结论】调节性T细胞与HepG2细胞体外共培养条件下,调节性T细胞所占比例越高,HepG2细胞增殖越快,细胞周期变化越明显;调节性T细胞可以通过提高HepG2细胞周期蛋白cyclinB、周期蛋白依赖性激酶CDK1的表达以及抑制周期蛋白激酶抑制因子P21的表达来促进HepG2细胞周期的进展。调节性T细胞引起细胞周期变化的机制主要靠调节性T细胞表面的RANKL与HepG2表面的RANK构成RANK-RANKL通路来引起周期变化以及刺激IL-6表达以及IL-17的分泌来改变细胞周期。