论文部分内容阅读
背景和目的：胃癌是常见的恶性肿瘤之一。化疗是晚期胃癌的主要治疗手段,然而耐药往往成了限制化疗药物疗效的一大瓶颈。质子泵例如空泡ATP酶(V-ATPases)在维持正常细胞及肿瘤细胞内外pH方面起了重要作用。质子泵抑制剂(PPIs)通过抑制V-ATPases的活性,调节细胞内外pH梯度,增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本研究探索常用质子泵抑制剂奥美拉唑(omeprazole)能否增强胃癌细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性及其可能机制。方法：1、胃癌MGC803细胞系培养；2、MTT检测法检测奥美拉唑单药或联合化疗药紫杉醇对细胞增殖率的影响,并计算奥美拉唑作用胃癌细胞系的IC50值；3、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(AnnexinV-FITC-PI)凋亡检测试剂盒检测单药或双药联合作用后细胞的凋亡情况；4、MDC染色,荧光显微镜观察奥美拉唑作用后的胃癌细胞中自噬泡的聚集情况；5、应用Western Blot法检测奥美拉唑作用后LC3蛋白的表达情况,检测细胞自噬变化；6、Western Blot法检测加入自噬抑制剂3-MA后奥美拉唑诱导的胃癌细胞凋亡相关蛋白caspase-3活化片段的变化情况；7、2’,7’—二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测奥美拉唑对胃癌细胞内ROS生成的影响；8、应用Western Blot法检测不同浓度奥美拉唑处理细胞后HIF-1α蛋白的表达变化情况。结果：1、奥美拉唑对胃癌MGC803细胞系的增殖具有显著抑制作用,培养时间越长,浓度越大,抑制作用越明显,其抑制作用呈时间及剂量依赖性,联合化疗药物紫杉醇,能显著增强MGC803对紫杉醇的敏感性；2、流式细胞术检测结果表明奥美拉唑预处理24小时联合化疗药紫杉醇能显著提高胃癌细胞的凋亡率；3、给予胃癌细胞不同浓度的奥美拉唑处理后,胞浆内阳性染色的自噬泡数量较对照组显著增加；4、免疫印迹实验表明奥美拉唑能剂量依赖性的诱导胃癌细胞LC3-II的表达升高；5、免疫印迹实验表明抑制细胞自噬后奥美拉唑诱导胃癌细胞凋亡相关蛋白caspase-3活化片段表达升高；6、DCFH-DA荧光探针检测表明奥美拉唑能显著诱导胃癌细胞内活性氧水平的增加；7、奥美拉唑能剂量依赖性的降低胃癌细胞内HIF-1α的表达水平。结论：奥美拉唑能显著增强胃癌细胞对化疗药紫杉醇的敏感性,增强紫杉醇对胃癌细胞的细胞毒性作用,其促进细胞死亡是通过抑制细胞自噬促进细胞凋亡发挥作用的。机制包括诱导细胞内的活性氧表达增加及对耐药基因HIF-1α的表达抑制。