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目的:探讨shRNA干扰小鼠大肠癌CT26细胞PARG表达后,对癌细胞与血小板粘附的影响及其相关机制。方法:采用搭载PARG-shRNA干扰片段的慢病毒(lentivirus)载体转染小鼠大肠癌细胞CT26株,对PARG实施沉默干扰。以未作处理的CT26细胞作为阴性对照组(blank control group),转染慢病毒空载体的CT26细胞作为空载体对照组(transfected with empty viral particles control group),转染PARG-shRNAi慢病毒载体的CT26细胞作为PARG沉默组(PARG-shRNAi group),Real time PCR法检测转染PARG-shRNA后CT26细胞PARG mRNA的表达,以测定沉默效果。采用活细胞染色法,在形态学上观察CT26细胞和血小板的粘附。Western blot法检测CT26细胞中PARG、PARP、Pi-akt、NF-κB、P-selectin和ICAM-1的表达,为证实PARG是通过Pi-akt信号通路调节下游因子,用akt磷酸化特异性抑制剂LY294002处理PARG沉默组CT26细胞,作为磷酸化akt抑制组(Pi-akt restrain group)。结果: 1.在real time PCR与western blot实验中,与对照组相比,PARG沉默组CT26细胞PARG表达量均明显降低(P<0.05),而阴性对照组PARG表达与空载体对照组相比则无明显变化(P>0.05)2.在粘附实验中,与阴性对照组相比,空载体对照组CT26细胞与血小板的粘附率无明显变化(P>0.05)。与阴性对照组相比,PARG沉默组CT26细胞与血小板的粘附率明显降低(P<0.05)。与PARG沉默组相比,磷酸化akt抑制组CT26细胞与血小板粘附率有明显上升(P<0.05)。3.在WB实验中,与阴性对照组相比,空载体对照组CT26细胞PARG、PARP、Pi-akt、NF-κB、ICAM-1、P-selectin表达均无明显变化(P>0.05)。与阴性对照组相比,PARG沉默组CT26细胞PARG、PARP、NF-κB、ICAM-1、P-selectin明显降低(P<0.05),Pi-akt明显升高(P<0.05)。与PARG沉默组细胞相比较,磷酸化akt特异性抑制剂处理后的CT26细胞Pi-akt蛋白表达明显下降(P<0.05),而NF-κB、ICAM-1、P-selectin明显上升(P<0.05)。结论: 1. PARG—shRNA慢病毒转染小鼠大肠癌CT26细胞后,成功沉默CT26细胞PARG的表达,且慢病毒载体本身对CT26细胞内各蛋白表达、生物学行为没有影响。2、抑制PARG可明显抑制小鼠大肠癌CT26细胞与血小板的粘附能力。提示:PARG可能在癌栓形成过程中有重要作用。3. PARG抑制的CT26细胞,其PARG、PARP、NF-κB、ICAM-1、P-selectin下降,Pi-akt表达增高,提示:PARG抑制降低CT26细胞与血小板之间的粘附,可能是通过下调PARP,上调Pi-akt信号通路,抑制NF-κB,进而降低ICAM-1、P-selectin的表达而实现。