论文部分内容阅读
研究背景:食管癌是最常见的恶性肿瘤之一,预后较差。中医药治疗食管癌有着悠久的历史。为探讨中医药在该领域的作用机制,我们选择了艾迪注射液。在术前给予食管鳞状细胞癌病人中药复方制剂——艾迪注射液,用组织芯片的方法,观察术后病人癌组织的多项免疫组化及凋亡指标。与对照组比较,以期发现艾迪注射液对食管鳞状细胞癌术前干预的分子生物学机制,为食管癌的综合治疗提供理论依据,为中药抗肿瘤机制研究提供了新的路径。研究方法:收集食管鳞状细胞癌病人46例,对照组23例,实验组23例,实验组术前给予艾迪注射液80毫升/天,静脉滴入,连用7天,对照组不用,两组术前其它处理相同。1.术后完成常规病理检查后,应用组织芯片技术,采用免疫组化法(共对照观察二十四种抗体)及原位末端核苷酸标记法(TUNEL)法检测。这些指标大致分为以下四类:①肿瘤耐药性相关指标的变化:LRP、MRP、MGMT、TS、P-gp、TopoⅡa、GST-p;②肿瘤增殖、分化、转移、预后相关指标检测:Ki-67、ER、PgR、COX-2、TIMP-1、TP、HSP70;③肿瘤相关癌基因表达检测:c-fos、C-myc、p53、c-erbB-2、nm23、MDM2;④凋亡相关指标:免疫组化法检测Bcl-2、Bax、NFκBP50、Fas;TUNEL法检测癌细胞凋亡状况。2.选取艾迪组8例,对照组3例,采用基因测序技术来检测、分析其p53基因第5-8外显子区域基因序列改变。研究结果:两组在性别、年龄、部位、癌肿大小、分化、浸润深度、淋巴转移方面均无显著性差异,具有可比性。①肿瘤耐药性相关指标:LRP、MRP、MGMT、TS、P-gp、TopoⅡa、GST-p在艾迪组中的阳性表达率分别为26.1%、34.8%、69.6%、69.6%、34.8%、43.5%、87.0%;对照组为39.1%、47.8%、52.1%、82.6%、39.1%、47.8%、87.0%,两组间无统计学差异(P>0.05)。②肿瘤增殖、分化、转移、预后相关指标:Ki-67、ER、PgR、COX-2、TIMP-1、TP、HSP70在艾迪组中的阳性表达率分别为65.2%、13.0%、13.0%、87.0%、34.8%、69.6%、8.7%;对照组为43.5%、17.4%、4.3%、78.3%、65.2%、60.9%、13.0%,两组间无统计学差异(P>0.05)。③癌基因表达相关指标:c-fos、C-myc、p53、c-erbB-2、nm23、MDM2在艾迪组中的阳性表达率分别为69.6%、0%、39.1%、56.5%、69.6%、52.2%:对照组为52.2%、4.3%、56.5%、56.5%、87.0%、47.8%,两组间均无显著性差异(P>0.05)。④凋亡相关指标:Bcl-2、Bax、NFκBP50、Fas在艾迪组的阳性率分别为39.1%、56.5%、47.8%、47.8%;在对照组的阳性率分别为78.3%、17.4%、87.0%、39.1%。两组相比较,Fas无显著性差异(P>0.05);Bcl-2、NFκBP50在艾迪组的表达阳性率比对照组显著降低,具有统计学差异(P<0.05),Bax在艾迪组的表达阳性率比对照组显著增高,具有统计学差异(P<0.05)。艾迪组的Bax/Bcl-2比值(1.22±0.72)比对照组(0.47±0.65)增高,具有高度显著性差异(P<0.01);NFκBP50与Bcl-2表达有正相关性(r_s=0.358,P<0.05);TUNEL法检测:艾迪组癌细胞凋亡阳性率(69.6%)比对照组(8.7%)明显增高,两组间有高度显著性差异(P<0.01)。NFκBP50与凋亡阳性率呈负相关(r_s=-0.297,P<0.05)。⑤各指标间的相关性分析:NFκBP50、MRP无明显的相关性(r_s=-0.076,P>0.05);NFκBP50、P-gp无明显的相关性(r_s=-0.044,P>0.05);NFκBP50、Ki-67无明显的相关性(r_s=-0.044,P>0.05);NFκBP50、COX-2无明显的相关性(r_s=-0.048,P>0.05);NFκBP50、p53无明显的相关性(r_s=0.016,P>0.05);ER与PR呈显著正相关(r_s=0.299,P<0.05);MRP与LRP呈正相关(r_s=0.641,P<0.01),有高度显著性差异;p53与Ki-67呈正相关(r_s=0.528,P<0.01),有高度显著性差异;p53与MDM2呈正相关(r_s=0.348,P<0.05),有显著性差异。⑥艾迪组p53基因第5-8外显子区域基因突变率为50%(4/8);对照组为33.3%(1/3)。艾迪组突变及多态性总发生率100%(8/8),对照组为66.7%(2/3)。结论:艾迪注射液对食管癌的术前干预作用可能与①通过下调Bcl-2蛋白的阳性表达,增大Bax/Bcl-2的比值、促进癌细胞凋亡。②与阻断NFκB通路有关,抑制NF-κB活性可下调Bcl-2的表达,进而诱导癌细胞凋亡。术前注射艾迪注射液能诱导癌细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。③食管癌的发生与多种分子机制有关,各因素之间存在互相影响。④应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的,具有快速、经济、准确的特点。⑤艾迪注射液不能减少p53突变或多态性的检出率。